动态FLIM研究的成像相机:Flimera

来自Horiba Scientific的Flimera相机是Flim技术的最新概念。它不是一个共焦点扫描系统,而是一种广泛的成像相机,具有使用简便的相机技术在视频速率下研究FLIM动态的固有能力。

特性

  • 直接得到了衰变动力学
  • TCSPC为每个像素架构提供了高达24,576个并发衰减
  • 包括EZTime Image简单高效的软件界面
  • 适用于先进和复杂的分子分析,例如检测疾病诊断和活细胞动态的生物标志物
  • 复杂多组分的一生
  • 样本分析最多五个指数衰变

CMOS技术的进步导致了在像素阵列上的成像传感器的开发,每个像素具有单光子雪崩光电二极管(SPAD)及其相关的时序电子设备,也建立在数字转换器(TDC)的时间内建立。

这允许快速(视频速率)基于在每个像素中单独实现的时间相关的单光子计数技术(TCSPC)确定荧光寿命。

SPAD和TDC夫妇。

图1所示。SPAD和TDC夫妇。图片来源:堀场科学

一个像素图像传感器,测量192 × 128,采用40 nm CMOS技术,集成到一个广域荧光显微镜设置。该传感器包含13%的填充因子,每18.4 x 9.2-μm像素包含一个小于40ps分辨率的TDC。

这允许并发测量多达24,576荧光寿命,每个有4,096个时间箱。借助专门的固件和从HORIBA EzTime图像软件实现科学、平均寿命,产生的荧光强度和相量图的TCSPC成像测量可以同时显示在实时视频的比例超过30 fps(参见图2)。

提出了四个同时​​数据集。

图2。同时给出了四个数据集.图片来源:堀场科学

的操作模式

已经开发了Flimera相机,用于来自Horiba Scientific的高度直观的EZTime图像软件。这种先进的软件用于拼接控制以及数据的获取和分析。Flimera相机提供了四种操作模式。

  • 手册-用户启动和停止采集提供FLIM数据和TCSPC强度图像终生分析。
  • 定时- 用于采集的用户定义的运行时间为寿命分析提供了FLIM数据和TCSPC强度图像。
  • 流到HDF5文件-tcspc数据可以为用户定义的句点流传输到HDF5文件。这包括每个像素中的每个光子的完整记录,以便信息不会丢失,并且可以用于重建帧以进行完整的衰减分析。
  • 相量图-补充直方图表示的潜力,以实时相量图的形式显示和选择生命周期数据(见图3)。相量图应该最初通过生命周期标准进行校准。

相量图。

图3。相量图。图片来源:堀场科学

使用有趣-1标记的酵母细胞和标准样品来说明视频速率能力,如图4所示。

从FUN-1标记的酵母细胞中提取的序列图像。

图4。从FUN-1标记的酵母细胞中提取的序列图像。图片来源:堀场科学

衰减来自于DeltaFLEX试管系统

图5。从Deltaflex杯杯系统衰减。图片来源:堀场科学

从24,578 SPAD像素之一的衰减显示了非常高的分辨率和TCSPC保真的FLIMera。

图5 b。从24,578 SPAD像素之一的衰减显示了非常高的分辨率和TCSPC保真的FLIMera。图片来源:堀场科学

Flim和Horiba.

一种广域成像方法是由新颖的像素检测和定时技术。这种成像方法大大减少了数据采集时间,从而方便了动态事件的分析。

Flimera相机占Horiba在荧光测量领域的悠久历史,众所周知,赢得了令人垂涎的物理商业创新奖。

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