'srrf-Stream'是一种新的实时超分辨率显微镜功能,完全适用于Andor'sIXON LIFE和IXON ULTRA EMCCD相机。
SRRF流超级分辨率
- 实时 - 改进工作流程,避免了后期处理。查看在“直播模式”
- 活细胞动力学 - 全视场超清晰图片每隔1-2秒。使用ROI> 10帧
- 低激发强度(MW-W /厘米2) - 长时间的活细胞观测和准确的生理学
- 常规荧光团,例如,GFP - 简单标记,没有照片切换必要
- 成本效益 - 将常规荧光显微镜转换为超分辨率显微镜
IXON SRRF-Stream比较
线粒体
荧光标记的细胞BPAE,记录有宽视场荧光显微镜和SRRF插播的图像比较启用IXON生命888 EMCCD相机。甲X63目标被使用,进一步放大2倍和560nm处的照明。100原始“输入”图像记录对于每个得到的超分辨率图像,导致0.5Hz的超分辨率图像速率。对于没有SRRF插播公正的比较,100个标准宽视场图像记录,然后平均。同时原始图像是细胞的较大场的,一个单元的缩小ROI在此示出,以便更容易地显示出通过一个小区域的线的强度分布进行比较。在解析力提升是十分明显。
有丝分裂
荧光标记的U2OS细胞系*的图像比较用Andor Dragonfly共聚焦旋转磁盘荧光显微镜和启用了SRRF-Stream的IXON Life 888 EMCCD相机。使用X63目的,额外的2倍倍率和488nm照明。在有丝分裂主轴中的细节水平中,可以注意到解决电力的无与伦比的改进。这另外在通过该区域绘制的比较线强度分布中证明。
* U2OS细胞系是固定的,用抗α微管蛋白一级抗体(绿色,AF488)和鬼笔环肽(红色,若丹明)来可视化F-肌动蛋白,DAPI染色,以显现细胞核染色。样品制备Klebanovych A.,细胞骨架的AS CR的IMG的生物学实验室,v.v.i.
srrf vs sim.
HCV感染细胞用抗NS5A染色。这里,完成景区(WF),结构化照明显微镜(SIM)和SRRF图像(SRRF图像)的比较。使用相同的物镜和光路记录在同一显微镜上的图像具有相同的细胞领域。使用具有6.5毫米像素的SCMOS检测器记录SIM的唯一差异,而使用具有16毫米像素的IXON EMCCD检测器记录宽场和结果SRRF。SRRF的更大的分辨率是显而易见的,指示SRRF在经典衍射极限上完成大于两倍的改善。SIM理论上是限于古典衍射极限的两倍降低。样本由UCL的Grove Lab提供。
有丝分裂2.
哺乳动物细胞经历动力。蓝色表示DNA染色,绿色微管和红色kinetochores。左图示出了使用SRRF流获取的等效图像的宽ffieldZ堆叠和右图像。麦克兰大学菲尔奥克兰的样本由伦敦大学(UCL)大学学院的Henriques实验室进行成像。
BCS-40膜
标记细胞掩模活BSC-40细胞的200S时间推移,并用635nm的LED的照明成像。第一100个帧对应于与1秒的曝光宽视场成像;第二100帧对应于其中每帧从SRRF插播产生50幅图像(20毫秒的曝光时间)的处理SRRF插播成像。David Albrecht(Ricardo Henriques和Jason Mercer Labs在UCL)的样品准备。
Clathrin Pits.
活HeLa细胞,标记的mCherry,在2 FPS记录在宽视场显微镜的网格蛋白小窝的比较图像。100原始“输入”图像记录对于每个得到的超分辨率图像,从而产生2 FPS的超分辨率图像速率。的线的强度分布是通过SRRF插播图像的小区域中示出,表示相距150nm的结构的分辨率。由卡隆雅各布(里卡多·恩里克斯和马克·马什实验室在UCL)样品制备。
酵母
裂变酵母利用表达菌株的比较3D投影蒙太奇。使用标准宽ffield与SRRF-Stream宽FIFERE录制,使用相同的曝光时间。穆罕默德·巴拉姆兰的实验室(UC.Warwick)的实验室(UCL)提供了穆罕默德的实验室(UCL)。
血液
比较标准宽视场和血小板广角SRRF插播图像,红色膜,绿色内部颗粒。卡特勒实验室样本礼貌在伦敦大学学院。
管蛋白
现场HeLa细胞的仍然宽泛的表达微管蛋白-GFP的图像,然后在1FPS(SRRF流分析为20毫秒暴露时的SRRF流分析)的SRRF流时间流逝。David Albrecht(Ricardo Henriques和Jason Mercer Labs在UCL)的样品准备。
IXON SRRF流的应用程序
其通过经典衍射极限推,并且附加能力,实时实现这一点,与非复合物样品标记,常规设备和用低强度照明时,SRRF插播使得方式来解锁以前未观察到的蜂窝结构和行为app亚博体育,在低光无可比拟的时空分辨率的损坏友好的方式。
SRRF流的观察能力
- 酶结构分析在子细胞内水平下阐明
- 单个分子的跟踪细胞内
- 利用该追踪以获得理解为单独的分子机械,支撑细胞生理学
- 有了这个新的信息,更新细胞功能的机型
SRRF流的应用
- 薄膜融合涉及单独的圈套蛋白机械
- 突触囊泡的动态变化
- 信号转导过程和细胞到细胞通信和分化
- 由于突触可塑性和学习,树突刺刺改革