使用蛋白聚合度量改善生物药

Proteins易随时间归并,这被认为是生物制药行业的一个主要问题。这是因为聚合物的存在会激活免疫响应-生物药的危险因子

工具化

尺寸排查色谱学(SEC)是一种强健技术,广泛用于探索蛋白质聚合sEC工具组合和光散射使得能对蛋白进行性分子权度测量,而不论其保留量大小转而帮助理解蛋白样本行为,使单片体、寡头体和样本聚合体的分子量测量成为可能

图1ViscotekSEC-MALS20系统

多角光散射应用能测量显示异向散射分子半径图1显示其中一种工具ViscotekSEC-MALS20系统20角光散射装置可测量蛋白质和蛋白综合物的分子权增加更多检测器包括动态光散射(DLS)、固有粘度(IV)和集中检测器(RI、UV)可帮助从单证交系统测量获取更多数据

文章讨论使用SEC分选蛋白并随后SEC-MALS分析以测量其寡头和聚合物的分子权重

实验程序

TDARI检测器用于SEC-MALS20系统连接ViscotekTDAmax系统测量集中度样本沿2xViscotek蛋白列隔离磷缓冲盐水用作移动相位,所有样本解析

Bovine血清相册体,蛋白质特征良好分子重量,用于标定SEC-MALS系统探测器和柱保持30摄氏度,实现良好的分离并优化基准稳定性

实验结果

BSA样本通常含有单片机、寡头机和大集料单片机、开蓬机和修剪机的峰值清晰可见,并使用MALS精确测量分子权值多差高序聚合物也存在于样本中。集合无法单个解决BSA色谱图显示图2,BSA测量结果表1

图2BSA色谱显示折射索引(red)和SEC-MALS(90摄氏度)(orange)检测器信号SEC-MALS测量的分子权值黑封

表1.分子量BSA样本不同组件

	聚合物	触发器	迪默	单调器
峰值RV-	13.84	14.31	15.37	17.05
MN-KDA	337.3	199.4	133.6	66.1
Mw-	378.3	201.2	133.9	66.3
Mw/Mn	1.122	1.009	1.003	1.002
Rg(w)-	N/C	N/C	N/C	N/C
WtFr(Peak)	0.04	0.057	0.423	0.745

单片机、开蓬机和修剪机顶部的分子权值高度稳定,表示单片机分子权值稳定 即为寡头分子权值微量在由多分布式群组成之最早稀疏素材中极易变换特征变换集合 不太可能活动峰值总样本分数确定在'WtFr'列中

Throgloblin分析第二蛋白质图图3显示从不同角度获取的MALS信号可见于MALS绘图中(图4),测量结果见表2

图3色谱rogloblin显示折射索引(red)和SEC-MALS(90摄氏度)(orange)检测器信号SEC-MALS测量的分子权值黑封

图4sEC-MALS检测器信号表表yrogloblin

表2.测量分子权值 各种峰值 yrogloblin样本

	聚合物	单调器
峰值RV-	11.60	12.50
MN-KDA	1601.0	681.5
Mw-	25880	686.0
Mw/Mn	1.617	1.007
Rg(w)-	N/C	N/C
WtFr(Peak)	0.167	0.833

根据RI检测器显示,rogloblin样本划分为两个峰值,但SEC-MALS检测器检测到三个峰值微量超大聚合物由SEC-MALS检测器识别,但RI检测器只能看见单分子量为686kDa, 介于669kDa分子量的3%单值峰值稳定表示此群为单差值

聚合峰值分析成单元值显示高多分子权值(多分布式),显示它们是无序聚合物聚合值大约占样本的17%蛋白质分子量高,SEC-MALS能够显示单体和聚合物散射为异向正因如此,无法确定本样本中峰值中的Rg

Pepsin分析最后样本,图5显示其色谱图SEC-MALS信号从不同角度可见LALS绘图(图6),测量结果见表3

图5Pepsin染色图显示折射索引(red)和SEC-MALS(90摄氏度)(orange)检测器信号SEC-MALS测量的分子权值黑封

图6sEC-MALS检测信号色谱

表3.测量分子权值 不同峰 spsin样本

	聚合物	单调器	降解产品
峰值RV-	10.84	18.33	20.92
MN-KDA	3892.0	34.4	4.7
Mw-	4431.0	34.7	6.4
Mw/Mn	138	1.008	1.364
Rg(w)-	69.9	N/C	N/C
WtFr(Peak)	0.008	0.569	0.423

epsin样本划分为两个主要峰值,其中第二个峰值测量分子权为34.7kDa,接近psin已知分子权为35kDa最大峰值的分子权值高得多多变,清晰显示它有一些失序综合物,这些综合物很可能不再功能化。

光散度峰值虽然如此之大,但集合值低于样本总材料的1%依据MALS绘图,这些聚合物强异性散射器,从而允许测量Rg表显示测量Rg值约70纳米

Pepsin结构非球状, 表示它大于预期 蛋白质有分子权聚合体大小说明结构在聚合体变大前实际持续epsin单片机不足以测量Rg样本中第三个峰值定义不清晰,可测量分子权值(约6kda)。

结论

ViscotekSEC-MALS20系统测量各种蛋白质分子量和聚合物的能力

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