透明质酸(HA)、天然无支链的多糖、强烈的主题研究的潜在使用化妆品,药理学,医学和眼科应用程序。HA的生化的行为依赖于材料的特点,包括分子构象,内在粘度(η),衡量分子量(MgydF4y2BawgydF4y2Ba),分子量分布或多分散性指数(PDI)。gydF4y2Ba
史Mendichi组di Chimica delle Macromolecole(意大利米兰)进行了许多分析涉及在线秒使用mal的HA,毛细管粘度测定法和浓度检测。gydF4y2Ba
这些探测器的独特组合不仅决定了所有上述材料的特征,而且分析样本固有粘度和分子构象信息通过使用Mark-Houwink-Sakurada(肉类)的关系。本文介绍了在线通过mal HA的绝对描述属性,微分折射法,微分粘度测定法检测器串联。gydF4y2Ba
仪表gydF4y2Ba
这种分析涉及七个单独的HA样本来自不同来源,从σ卵白蛋白,和所有其他所需的化学物质的分析级。色谱系统包括一个高效液相色谱系统,一个自我注射器(安捷伦1100 900 -µl注入循环),和溶剂脱气器(ERC L761)。gydF4y2Ba
SEC列系统由水凝胶聚合物实验室——哦(8µm)分离柱列。磷酸盐(PBS, 8毫米磷酸二钠,22毫米单碱的磷酸钠,150毫米氯化钠在水中MilliQ-grade)是移动阶段,和流量为0.5毫升/分钟。gydF4y2Ba
色谱检测器用于系列是一个黎明EOS mal装置,一个ViscoStar微分粘度计,和一个Optilab雷克斯微分衍射仪,从怀亚特技术。mal探测器帮助执行绝对摩尔质量计算没有列校准要求,参考标准,或“蒙混因素。”gydF4y2Ba
微分粘度计采用传统的十字型毛细管桥设计,如图1所示。这座桥是由四个equal-impedance毛细血管左下的手臂拥有一个有效的零阻抗延迟体积。gydF4y2Ba
桥可以容忍适度泵脉冲,由于其固有的不敏感设计的压力波动。此外,设备配备了珀尔帖热电装置精确温度控制在一个更广泛的温度范围。现代电子产品的独特组合,精确的温度控制,桥梁设计产量的设备以极大的S / N。gydF4y2Ba
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图1所示。gydF4y2Ba差动式粘度计设计的示意图。gydF4y2Ba
使用微分折射计浓度进行测量。准确的热控制的珀尔帖效应设备使热稳定性达到或低于室温,导致设备稳定的基线和非常高的S / N。gydF4y2Ba
浓度(c)值从微分折射计和获得ηgydF4y2BaspgydF4y2Ba价值从微分获得粘度计可以直接计算样品的特性粘度使用肉类卫生关系到每一个数据块在一个洗脱峰。将光散射装置使得数据适合肉类方程。肉类的关系,gydF4y2Ba
(η)= K MgydF4y2Ba一个gydF4y2Ba
在那里,M =分子量;“K”和“a”=肉类系数。gydF4y2Ba
这些肉类系数是溶剂相互作用和聚合物的形状。流体力学体积VgydF4y2BahgydF4y2Ba的样本也可以计算使用Einstein-Simha关系:gydF4y2Ba
VgydF4y2BahgydF4y2Ba= M(η)/ (2.5 ngydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)gydF4y2Ba
在那里,NgydF4y2Ba一个gydF4y2Ba阿伏伽德罗常数。水力半径rgydF4y2BahgydF4y2Ba从V可以计算吗gydF4y2BahgydF4y2Ba通过以下方程:gydF4y2Ba
rgydF4y2BahgydF4y2Ba= (3 vgydF4y2BahgydF4y2Ba/ 4π)gydF4y2Ba
阿斯特拉V软件包从怀亚特技术被用来执行实验收集和数据分析。这个软件允许所有18 mal的收集和随后的分析角度与美联社,IP,微分屈光计检查信号。gydF4y2Ba
实验过程和结果gydF4y2Ba
它是必要的,以确定准确的系统常数的试验装置之前进行色谱分析。gydF4y2Ba
微分粘度计需要放置上游的微分折射计因为微分折射计的基线行为容易受到反压力的影响。因此,最后一个探测器必须折射计在色谱流动路径最好的S / N。总结7公顷的材料特性提供了样本如下表:gydF4y2Ba
表1gydF4y2Ba。总结哈样品材料的特点。gydF4y2Ba
| HA样本gydF4y2Ba |
HA源gydF4y2Ba |
米gydF4y2BawgydF4y2Ba(克/摩尔)gydF4y2Ba |
PDIgydF4y2Ba |
RgydF4y2BaggydF4y2Ba(nm)gydF4y2Ba |
(η)(mL / g)gydF4y2Ba |
rgydF4y2BahgydF4y2Ba(nm)gydF4y2Ba |
| 农业的gydF4y2Ba |
细菌发酵gydF4y2Ba |
2.64 e + 05gydF4y2Ba |
1.19gydF4y2Ba |
57.7gydF4y2Ba |
632年gydF4y2Ba |
27.7gydF4y2Ba |
| HA-2gydF4y2Ba |
脐带gydF4y2Ba |
2.84 e + 05gydF4y2Ba |
1.23gydF4y2Ba |
66.1gydF4y2Ba |
652年gydF4y2Ba |
28.3gydF4y2Ba |
| HA-3gydF4y2Ba |
鸡梳gydF4y2Ba |
6.62 e + 05gydF4y2Ba |
1.10gydF4y2Ba |
109.1gydF4y2Ba |
1431年gydF4y2Ba |
51.1gydF4y2Ba |
| HA-4gydF4y2Ba |
细菌发酵gydF4y2Ba |
1.10 e + 06gydF4y2Ba |
1.45gydF4y2Ba |
165.4gydF4y2Ba |
1754年gydF4y2Ba |
57.7gydF4y2Ba |
| HA-5gydF4y2Ba |
脐带gydF4y2Ba |
1.44 e + 06gydF4y2Ba |
1.06gydF4y2Ba |
180.4gydF4y2Ba |
2208年gydF4y2Ba |
77.7gydF4y2Ba |
| HA-6gydF4y2Ba |
鸡梳gydF4y2Ba |
1.62 e + 06gydF4y2Ba |
1.06gydF4y2Ba |
182.4gydF4y2Ba |
2671年gydF4y2Ba |
86.1gydF4y2Ba |
| HA-7gydF4y2Ba |
“自然资源”gydF4y2Ba |
1.76 e + 06gydF4y2Ba |
1.02gydF4y2Ba |
207.9gydF4y2Ba |
2655年gydF4y2Ba |
89.9gydF4y2Ba |
所有溶液浓度为0.1毫克/毫升HA在PBS和注入成交900毫升。哈,dn /直流值0.167 (mL / g)从文献中获得。低浓度的选择和大型注射体积是防止潜在viscous-fingering HA样品在分离柱。结果与文献值一致。对于每一个样本,注射进行多次验证结果的可重复性。gydF4y2Ba
HA的典型ηsp色谱样品连同相应的MgydF4y2BawgydF4y2Ba,RgydF4y2BaggydF4y2BargydF4y2BahgydF4y2Ba值在整个峰是如图2所示。典型的微分式粘度计的S / N这些HA的跟踪分析2200:1的顺序,一个数量级比pulse-free,过滤数据毛细管粘度测定法。gydF4y2Ba
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图2。gydF4y2Ba一个典型的ηgydF4y2BaspgydF4y2Ba色谱相关的HA样本一起MgydF4y2BawgydF4y2Ba,RgydF4y2BaggydF4y2BargydF4y2BahgydF4y2Ba在高峰值。gydF4y2Ba
肉类的阴谋已经创建了所有样品评估分子构象的信息。代表肉类的示例HA-2如图3所示。还可以观察到的最小二乘回归肉类跟踪,如图3所示。虽然不是呈现在这篇文章中,所有七公顷样品显示肉类曲率类似于图3所示。gydF4y2Ba
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图3。gydF4y2BaMark-Houwink-Sakurada情节和线性HA-2适合样本。gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba我gydF4y2Ba的样本值HA-2如图4所示以较低的分子量范围从1.0下降到接近0.55高分子量。其他六个HA演示了一个样品gydF4y2Ba我gydF4y2BaHA-2行为相似,典型的一个gydF4y2Ba我gydF4y2Ba值从1.1 0.5低分子量较高的分子量。gydF4y2Ba
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图4。gydF4y2BaMark-Houwink-Sakurada情节,二阶和ai与日志样本HA-2 (Mw)。gydF4y2Ba
这种行为是在良好的协议与HA演示了自流排水的理论,非高斯链行为较低的分子量。聚电解质驱动分子固有的刚度承担更扩展构象分子量较低,导致相应的高gydF4y2Ba我gydF4y2Ba价值。当有一个分子量增加,gydF4y2Ba我gydF4y2Ba值下降由于HA转换为高斯链行为。这可能有助于描述哈肉类常量的广泛发表的文学作品。gydF4y2Ba
结论gydF4y2Ba
mal的结果表明,该组合仪表、微分粘度计,和一个微分折射计秒是一个理想的设置来探索生物聚合物材料特性的哈,包括绝对分子量、半径信息,和分子量分布。测量值是在良好的协议与历史文献价值。gydF4y2Ba
这些探测器与软件的使用导致了快速、精确,并绝对分析HA属性以前所未有的S / N和不要求校准曲线的探测器。gydF4y2Ba
这些信息已经采购,审核并改编自怀亚特提供的材料技术。亚博网站下载gydF4y2Ba
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