溶质的电泳迁移率很大程度上受溶剂环境的影响,特别是参数,如溶液pH,温度,溶质浓度,离子强度或配方辅料。
数据表明,在低离子强度时,溶质电荷占优势,通过长期相互作用产生排斥。在高离子强度时,反离子会越来越多地屏蔽这些离子间的相互作用,通常会导致溶质分子斥力的减少。
这一观察表明,离子屏蔽支撑短期和中档相互作用,但降低远距离电荷 - 电荷相互作用。溶液的离子强度增加引起的溶质分子的局部性抗衡离子的计数,由此导致的迁移率降低。
该分析的目的是证明降低引起该蛋白质牛血清白蛋白(BSA)增加氯化钠(NaCl)浓度迁移率的效果。
高盐溶液的流动测量
从历史上看,很难或不可能具有用于与接近或高于生理盐水条件电导率含水样本移动性测量。如果溶液的导电性能,然后施加所需的电用于移动性测量将导致横穿溶液的电流。
这进而引发电化学氧化还原反应,导致电极表面电解,释放气泡,影响驱动电场,牺牲用于迁移率测量的光散射信号。
Möbiuζ (Mobius)流动池由怀亚特技术的Atlas配件加压,用于在高电导率下测量流动性,以抑制和减少现有气泡的总体体积。
Möbiuζ电池是一个封闭系统,便于自动化和高通量平行测量流体动力学半径和电泳流动性。预先编程的高效液相色谱序列提供了500 pL的样品注射,从而可以方便地自动测量多个样品。
分析和结果
以2mg / mL的制备成50mM磷酸缓冲盐水,其中氯化钠的总浓度50和2000毫米之间变化的样品。这,反过来,占地面积5.6毫秒/厘米的50mM磷酸盐之间的电导率范围;50mM的NaCl和86.2毫秒/厘米为50mM磷酸盐;和2000毫米的NaCl。
每个样品进行6次测量的总时间为3分钟,另外还需要5-12分钟的时间来交付样品,停止流动,平衡,然后洗掉消耗的样品。每个样品注射三次,共18次测量。低样品温度(4°C)、低电压(3.5 V)和短测量时间的组合降低了电解和样品降解。
图1。电泳迁移率与对2mg的增加的盐浓度的情节/ mL BSA的注射在4℃下进行测定。
图1显示了在4°C下测量2mg/mL BSA注射时电泳迁移率随盐浓度增加的变化。在NaCl的最低浓度,即50 mM时,测量的迁移率非常高,为-0.51 mM cm/Vsec。随着NaCl浓度的增加,牛血清白蛋白的迁移率降低,最终在-0.33 mm cm/Vsec左右趋于平稳。
当NaCl达到2000 mM时,迁移率仍然接近这个值,相应的电导率为86 mS/cm。离子强度的增加导致与溶质分子相关的反离子增多,导致分子电荷的筛选,从而降低了电泳迁移率。
结论
通过使用Möbiuζ流池、Atlas和自动取样器,高盐度样品的自动分析成为可能,这可能是第一次。
在Möbiuζ硬件的多功能性使得它来衡量在高电离度的配方和解决方案的流体力学半径和电泳迁移高度方便的工具。这,反过来,使得能够在高盐缓冲液中制备的样品的电荷表征。
这些信息已经从Wyatt Technology提供的材料中获得、审查和改编。亚博网站下载
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