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高效液相色谱或高压液相色谱(HPLC)是分析化学和生物化学中用于分离化合物混合物的色谱方法，以识别、量化或纯化混合物的单个组分。
反相高效液相色谱或超高效液相色谱(UHPLC)是常用的分离方式。它提供了具有疏水和有机功能的化合物的动态保留。所有目标化合物与固定相和流动相之间的疏水和范德瓦尔斯型相互作用的结合使这些化合物能够通过反相保留。
高效液相色谱是如何工作的?
在非常少量的情况下，待分离和测试的样品混合物通过柱被送入流动相流中。有不同类型的柱可用不同的颗粒大小和表面的吸附剂。
混合物以不同的速度通过色谱柱，并与吸附剂相互作用，也称为固定相。混合物中各组分的速度取决于1)其化学性质，2)柱的性质和3)流动相的组成。某一特定分析物从色谱柱中出现的时间称为其保留时间。保留时间是在特定条件下测量的，并被认为是给定分析物的识别特征。
吸附剂颗粒在性质上yabo214可能是疏水的或极性的。常用的流动相包括任何水和有机溶剂(如乙腈和甲醇)的混溶组合。也可以使用无水流动相。
流动相的水溶液组分可能含有甲酸、磷酸或三氟乙酸等酸或盐，以使样品组分能够分离。在色谱分析过程中，流动相的组成要么保持不变，要么变化不定。对于与固定相亲和度相差不大的样品组分，恒相法是有效的分离方法。在不同的方法中，流动相的组成从低到高的洗脱强度不同。流动相的洗脱强度通过分析物的保留时间来反映，高的洗脱强度产生快速洗脱。
流动相的组成是根据几个样品组分与固定相之间的相互作用强度来选择的。
HPLC分配过程与液-液萃取过程相似，但前者是连续过程，而后者是逐步过程。建议进行试验分区过程，以确定能提供充分分离的准确高效液相色谱方法。
HPLC系统制造商
在今天的市场上有广泛的HPLC选择。以下是各类高效液相色谱系统生产商的名单，并对他们的产品进行了简要介绍:
- Dionex是一家基于色谱科学的公司，生产UltiMate®3亚博老虎机网登录000快速分离LC系统，UltiMate 3000 rslnano系统和Corona®系列通用带电气溶胶探测器。
- Jasco分析仪器提供一系列高效液相色谱系统。LC-2000 Plus系列高效液相色谱系统是独一无二的配置。这些高效液相色谱系统具有高性能和低成本，可以适应几乎任何要求，从简单的等ocratic QA到先进的多溶剂/多柱方法开发。isoocratic LC-2000plus-Iso配有泵，脱气器，自动取样器和UV/Vis检测器。该泵的设计流量从1µL到10mL/min，压力高达500 bar，适用于2、3、4、6和高达10mm ID柱。二元梯度LC-2000plus-HPG与等晶体系相似，但具有双溶剂梯度泵结构。该泵的流量与1mm柱兼容。第四系梯度LC-2000plus-LPG也与等晶系相似;然而，该模型提供了一个四元梯度泵配置，以最大的溶剂灵活性。
- Gilson公司的制备型高效液相色谱系统具有广泛的流动范围，可以适用于半制备和制备分离。它的高泵送功率允许广泛的制备柱尺寸。该系统设计了一个新的冲洗站系统，包括一个流动的喷射冲洗，并允许使用多达两种不同的冲洗溶剂。
- 来自AAPPTec的Sharp™HPLC系统提供了由微处理器控制的泵，从而实现高度精确和高精度的流速，这有助于获得优秀的分析重现性和最高的测量精度。
目前市场上的其他制造商有安捷伦，贝克曼库尔特，生物rad和巴克科学。
高效液相色谱法的好处
HPLC系统的主要好处如下:
- 控制和自动化色谱仪器
- 提供数据管理、安全特性、报告和仪器验证。
- 强大,适应性强
- 通过管理分析的所有领域——从样品到仪器，从分离到报告结果，提高生产率。
- 负担得起的
高效液相色谱的应用
高效液相色谱技术的主要目的是鉴定、量化和纯化特定的分析物或化合物。定量分析和定性分析都可以做。hplc可用于以下应用:
- 水净化
- 制药工业中杂质的检测
- 微量组分预浓缩
- Ligand-exchange色谱法
- 蛋白质的离子交换色谱法
- 碳水化合物和低聚糖的高ph阴离子交换色谱
高效液相色谱法
资料来源及进一步阅读
本文于22日更新nd2019年4月。