分析马尿中的阿片类肽脱吗啡

Dermorphin是一种阿片类六肽，是一种从南美青蛙的皮肤分泌物获得的衍生物。与吗啡1相比，它是镇痛作用的30-40倍。氨基酸D-丙氨酸的存在通过对蛋白酶介导的降解具有抗性来使皮肤宁独特。

尽管首选D-氨基酸肽用于肽型药物设计和低免疫原性反应，但其在赛马中的应用推动了其流行。皮肤球的止痛特性用于改善赛马的性能超出其物理极限，从而对动物造成伤害。由于这一事实，赛车专员的协会国际模型规则将皮肤芬分类为I类禁止的物质。

由于相关的复合矩阵和已建立的标记的内标的不可用，因此在马尿液中量化皮肤球是一个困难的分析。本申请说明描述了使用A的定量分析在马尿中的定量分析EVOQ Elite Model LC三倍四极杆质谱仪。测定的线性动态范围为0.05-100 ng/ ml，使所需的定量低限（LLOQ）达到0.05 ng/ ml。

实验

色谱法（Advance HPLC）

• 列：C18，3µ，2.1x100mm（ACE 3µ，C18，100x2.1mm）
• 流速：0.4ml/min
• 注射量：40µL
• 流动阶段A：具有0.2％甲酸的水
• 流动期B：乙腈，甲酸0.2％
• 梯度条件：
  • 0.00min 5％b
  • 0.20分钟5％b
  • 8.00分钟95％b
  • 8.50分钟95％b
  • 8.51分钟5％b
  • 12.50分钟5％b

质谱法（EVOQ Elite）

• VIP加热 - ESI温度：350°C
• 雾化器气：70个单位
• 加热气：70个单位
• 锥体气：10个单位
• 锥体气温：250°C
• 主动排气：开
• 喷射电压：+4000 V
• Dermorphin和Deltorphin II的MRM（作为内标）：
  • M/z 803.4> 602（CE = 20V），量词离子
  • M/Z 803.4> 202（CE = 32V），预选赛离子
  • M/Z 783> 277（CE = 40 V），内标

图1。Bruker Evoq

结果与讨论

这EVOQ Elite Triple Quadrupole质谱仪用于在马尿液中开发皮肤球的测定法。通过固相提取进行马尿样品制备。该分析能够轻松实现0.05至100 ng/ml之间的准确定量。图2描绘了马尿中的0.05ng/ml皮肤的MRM色谱图。

图2。在0.05ng/mL（LOQ）和马尿液中的Deltorphin（绿色痕迹）时，脱氧蛋白的色谱图。

图3。在0.05-100ng/mL范围内的马尿中脱甲醇的校准曲线

表格1。显示了低，中和高QC水平的响应因子，RSD％的7.3％，这说明了强大的离子源性能，因为消除了用于防止基质污染离子源的转移阀。

表格1。：QC的响应因子％RSD

QC	浓度（PPB）	面积比	响应因素
低质量控制	0.3	0.01000	0.03335
低质量控制	0.3	0.01031	0.03438
QC中期	6.0	0.22314	0.03719
QC中期	6.0	0.17834	0.02972
高QC	50.0	1.67945	0.03359
高QC	50.0	1.62102	0.03242
响应因子RSD			7.3％

该信息已从布鲁克化学和应用市场提供的材料中采购，审查和调整。亚博网站下载

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