FT-IR显微镜是一种完善的方法,用于化学鉴定颗粒或污染物,并可视化某些物质在复杂化合物中的分布。yabo214由于使用了现代焦平面阵列探测器,该技术在过去几年中已发展为一种新的成像技术。它允许在几分钟内具有很高横向分辨率的大型样品区域的测量。
ft-ir作为成像系统
测量后,根据易于理解的图像对结果进行评估。在二十多年中,甚至使用傅立叶变换红外(FT-IR)光谱法分析了非常小的样品。为此,已经开发了具有镜像光学的显微镜,不仅允许视觉观看,还允许对样品的红外光谱分析。最近,已经部署了配备有焦平面阵列(FPA)检测器的FT-IR显微镜,该检测器由16 x 16的矩阵组成,最高为128 x 128检测器元件。该新数组检测器允许用户同时获得多达16,000个像素/光谱,因此使FT-IR显微镜也成为一种成像技术。
空间分辨率
为了FT-IR显微镜就像在其他类型的光学显微镜中一样,横向分辨率受光衍射的限制。以下公式描述了仍然可以分离两个点的最小距离(δ):
δ=0,61λ / Na,
na是物镜的数值孔径,λ是光的波长。
由于FT-IR显微镜中镜像目标的数值孔径约为0.6,因此可以降低上述公式如下:
距离δ=波长λ。
图1显示了样品的可见图像,该图像由玻璃上的金属条的常规图案组成。
一种)
b)
C)
图1。玻璃上金属条的图案。上a)图像是样本的视频图像。视频图像覆盖了约400 x500μm的样品区域。使用FT-IR成像系统Bruker Hyperion 3000配备有FPA检测器(64 x 64 X4探测器元件)和36倍物镜(Na = 0.5),使用FT-IR成像系统Bruker Hyperion 3000在反射模式下以1,1μm的像素分辨率进行了测量。。在B 1650厘米的IR图像中-1(≅6μm波长)在3200厘米处的I IR图像中显示-1(分别为3μm波长)。
条以不同尺寸的平行定向条排列,并由不同的宽间隙隔开。如图1所示,大约400 x500μm的样品面积以像素分辨率的透射模式测量,这是采样区域的尺寸,该采样区域的大小是使用1.1μm的一个检测器像素上成像的。FT-IR成像技术。光谱的强度在1650厘米的波长处-1(≅6μm;图1b)和3200厘米-1(≅3μm;图1c)以错误的颜色显示。两个错误的颜色图像显示,金属条的矩形形式变得更加清晰,并且在3μm的波长上比在处于3μm的波长更好地解析了。波长为6μm。该结果表明,设计良好的FT-IR成像系统的横向分辨率仅受光衍射的限制。
当您仔细观察图1c中标记的第6和7组中的红线时,这一事实变得更加明显。如图2所示,第6组中的条在14至8μm分离的波长,3μm和6μm处得到很好的分辨。在3μM波长下达到的横向分辨率比在6μm的波长下要好得多。根据理论期望,发现结构可以在6μm的波长下解析至6μm。如果波长为3μm,则显示分辨率限制约为3μm。
已经实现了高空间分辨率,因为使用的像素分辨率等于每个检测器的边缘长度为1,1μm,比要解析的结构高得多,即所有的条和差距已在几个像素上成像如图2所示,不仅在一个单个像素上。
图2。分辨率概况。该图显示了根据图1C中绘制的红线进行的第6和7组切割。蓝色痕迹对应于3200厘米处的轮廓-1红色痕迹对应于1650厘米处的轮廓-1。
小麦茎的IR分析
动物和蔬菜组织的研究也是标准应用FT-IR成像。图3和4显示了小麦茎组织的结果数据。可以通过其特征吸收来检测主要的生化成分,例如蛋白质,碳水化合物和蜡/脂质。图4中的IR图像显示了这些组件在组织中的分布。如图3所示,该信息也可以合并为RGB图像,证明了蛋白质(绿色),碳水化合物(红色)和蜡/脂质(蓝色)的分布。
一种)
b)
图3。小麦茎。在一个小麦茎的视频图像(微型截面;厚度为10μm)中。视频图像覆盖了约500 x500μm的样品区域。RGB图像(B)显示了蛋白质(绿色),碳水化合物(红色)和蜡/脂质(蓝色)的组合分布。
一种)
b)
C)
图4。使用FT-IR成像系统Bruker Hyperion 3000配备了FPA检测器(64 x 64检测器元素)和15X目标(NA = NA = Na =)0.4)。单个IR图像显示蛋白质的分布(1710-1480cm-1,a),碳水化合物(1140 - 900厘米-1,b)和蜡/脂质(1770 - 1700厘米-1,c)在组织内。通过评估这三种生化成分的每个特征振动的强度,这些成分的分布已被可视化。
申请
FT-IR显微镜可用于广泛的应用。典型的应用是颗粒和最小污染的化学鉴定,涂料的均匀性的检查以及复杂混合物中多种不同组分的分布分析。yabo214该技术的一个重要好处是它可以用于分析几乎所有样本。此外,这是一种非侵入性方法,不需要检查样品的染色或标记。分子是根据其特征性振动来识别的,这些振动会因撞击IR束而激发。通过这种方式,FT-IR成像提供了有关分析样品区域的分子组成的信息。因此,此图像技术也称为“化学成像”。
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