一个单克隆抗体是安全有效的,分子必须从当生产保持稳定时使用。
虽然冷冻储存蛋白质在生物工艺行业的首选方法,这是导致冰水表面变性、低温浓缩,冷变性的蛋白质。1、2、3
偶尔,药物物质必须存储长时间之前转换成药物产品。约200 K,蛋白质经验玻璃化转变,通过它的大多数功能蛋白的改变。4
玻璃化转变发生在较低的温度由于个别蛋白质的动态行为的变化和粘度在玻璃的形成。
质谱(MS)有很多应用在制药行业。现代生物工艺的新要求和帕特和QbD方法的实现需要更好的理解这些过程。是理想的女士提供所需的信息丰富的数据。
然而,传统仪器大小姐,昂贵的,必须由专业人员操作集中的实验室。集成实时女士,分散,在需要的时候,提供必要的信息过程迅速,以更低的成本。
本文讨论利用创新型point-of-need微尺度电喷雾质谱仪(谱)分析,存储时间和条件的影响,媒介类型和喂养策略lgG质量来源于馈料式(新鲜)和灌注(冻)CHO细胞培养。
图1所示。中期®ProteinID质谱仪和大富翁TM采样接口单元。图片来源:Microsaic系统plc
焦点
分析不同贮藏条件的影响lgG样品和评估中期®ProteinlD包含在生物工艺操作。
实验
表1。实验样本。来源:Microsaic系统plc
| 条件 |
冷冻灌注免疫球蛋白样例 |
新鲜的美联储批免疫球蛋白样 |
| 文化的持续时间 |
18天 |
12天 |
| 采样时间 |
日常 |
12日th一天 |
| 介质类型 |
OptiCHOTM(热费希尔) |
动力学TM(热费希尔) |
| 饲料补充 |
没有一个 |
饲料和饲料C |
| 存储时间和温度 |
2年在-20°C |
一个星期在-20°C |
所有样品都是使用0.2微米过滤器澄清和磁珠纯化使用纯蛋白质组蛋白(Sigma-Millipore)。洗脱是1% (v / v)甲酸。样本注射2µL循环到女士,注射在一式三份。
手机媒体与标准lgG飙升产生上升恢复控制。使用的流动相是水:MeCN比例的比例,以及0.5% (v / v)甲酸。
图2。样品制备和工作流的概述。图片来源:Microsaic系统plc
结果
飙升的恢复控制的样本标准lgG显示一致的质量148.2 kDa的注入,如图3所示。新鲜的馈料式lgG示例还显示147.2 kDa的一致的质量。
注入冷冻灌注lgG样本表现出实质性的注射质量的变化,拥有大规模146.5 kDa lgG淋洗早在148年大规模注入和lgG kDa淋洗接近尾声的注入。
图3。上升恢复控制免疫球蛋白,新鲜的美联储批免疫球蛋白和冷冻灌注在注射免疫球蛋白质量分布。图片来源:Microsaic系统plc
lgG在冰冻的灌注和新鲜的馈料式生产样品质量分布的变化。图4给出了注入新鲜的馈料式和冷冻灌注样本,可以观察到在不同的注入配置文件的总离子色谱图(TIC)。
图4。美联储总离子色谱图(TIC)新鲜的批处理和冷冻灌注样品(上)。相应的质荷光谱(底部)抽搐在300到650秒。图片来源:Microsaic系统plc
有质荷谱在不同时间点的差异之间的样本。最大峰值(300秒),明确lgG样品的光谱可以观察到。
在峰尾(650秒),小lgG冷冻灌注中可以看到样品,由其他乘指控物种。
图5显示了冷冻灌注异构分布的样本群众在抽搐。不同lgG群众(146.6 kDa, 147.4 kDa)观察到峰值前后的注入。
增加信号峰值的尾巴在750年和1750年之间m / z和额外的繁殖物种也见过。
lgG样本的质量不均匀冻灌注注入和lgG质量均匀分布的新鲜馈料式注入意味着新鲜lgG馈料式具有更高的质量。灌注的长期贮存样品被认为是lgG恶化的主要原因。
这种异构lgGs人口可能进一步检查通过多糖分析这些样本。
图5。免疫球蛋白在冰冻的灌注质量分布样本。上面显示了提取离子色谱(共同)的注入冷冻样本。蓝色代表免疫球蛋白物种的强度和质量- 146.6 kDa的注入和绿色代表强度147.4 kDa的免疫球蛋白g物种大规模注入。红色代表信号强度在750 - 1750 m / z为其他观察指控物种繁殖。图片来源:Microsaic系统plc
结论
这部小说本文中描述的研究表明,小型point-of-need质谱仪可以监视lgG和蛋白质片段建立产品质量并提供机会。
质量分布有显著差异馈料式lgG新鲜和冷冻灌注样品存储一周和两年之后,分别。群众的相当大的差异表明,随着时间的推移可能发生恶化的蛋白质。
冰水表面变性和低温浓缩(这都是结果的存储条件随时间)可能会添加到观察异构质量分布。
然而,需要进一步的研究和实验来确定哪些喂养策略或中等lgG允许更好的优化生产。
确认
从材料最初由卡拉Tamang亚博网站下载从Microsaic系统和吉恩·弗朗索瓦•哈默尔博士。原来的作者要感谢Taehong Kwon和lronie Nagasena从麻省理工学院。
引用和进一步阅读
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- Escalante-Minakata, p . et al (2014) J Int食物。4,1 - 11 4
- 雷菲尔德w·J, et al ., (2017) J制药Sci . 8, 1944 - 1951
- 吊环D。et al ., (2003) Biophys化学,2 - 3,667 - 680
这些信息已经采购,审核并改编自Microsaic系统plc提供的材料。亚博网站下载
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