深入理解细胞生物功能需要了解细胞膜的具体成分,并因此了解蛋白综合体的结构和组织以及高分辨率调查工具高分辨率研究有可能通过使用冷阻技术通过破解复制准确描述膜
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简介方法
破解冷冻材料以披露内部特征的方法被称为冻结裂变需要物理分离(破解)冷冻生物样本并使用传输电子显微镜通过断裂面发布结构信息生物膜在冷冻时具有固有的缺水芯脆弱平面,因此,如果标本破损或断裂,断裂区往往会把屏障分解成半膜叶
结果为三维图像 细胞等离子膜配置 完全与内部屏障透视通过生成极精确的白金-碳复制折叠平面,这些特征可见电子显微镜
历史原创开发
50多年来,冷冻断电显微镜被广泛接受为微镜结构生物研究中的重要方法方法组件早在1950年代就存在初级阶段,但其潜力大约在1960年引起细胞生物学家的注意。
解释冲突原创地阻塞使用冻结断层,但一旦修复后,方法在1970年代和1980年代发扬光大,在解释细胞膜和悬浮体结构结构方面提供突破,而传统薄片电子显微镜无法实现。
阶梯
有四种进程创建冻结断层复制样本必须在初始阶段快速冷冻标本在低温时猛烈断裂第三相位是真空覆层白金和碳生成冷破表复制件,继而洗除复制物消除生物材料此外,冷冻过程常在预处理后实施,外加分解和复制生成之间的补刻级
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快速冷冻常用方法是快速稀释液冷却器中适当封装标本(例如分冷却液态氮)。可惜,直到事先用低温防腐剂预处理后,以这种方式保存的大多数生物样本显示超结构冰晶退化Glycerol最常使用低温保护
复制分两步创建:后向支持平时方法,斜向向影射通过蒸发白金-碳样本薄涂层实现,并快速后附从上压缩的电益碳增强薄膜变形元素 冷破表层 转化成深度变化 仿真嵌入白金覆盖获取复制品后,试样受标准大气压并受环境温度约束二次氯化物溶液、铬酸或其他清洗化学物用于消除复制物生物分子
长处
阻塞电子显微镜技术一式研究技术,为微生物学家提供一连串重大优势starts使用,因为它是一种重复法,它可能同时提供生物组件面部和剖面透视,让研究人员精确观察断层平面内和薄膜表面特殊特征的构造和分布
甚至在使用生化预处理时,它提供另一种技术进一步处理,便于比较薄剖电子显微镜和FEM统计此外,当与单纯样本保存方法(如密码化)相加时,FEM完全消除生化固化的必要性,使其对检测文物特征特别有用。
方法使用
关于生物材料处理问题,已调查两个独特的冻结断层程序第一种方法生物组织先固定并干纯酒精,然后冷冻、分解、解冻绝对酒精,并关口干这种方法在检验卢门区细胞时产生巨大效果,这些细胞邻接自然解剖漏洞,如肝髓学或鲍曼肾胶囊初步方法通常很少显示细胞膜或核核素信息,因此探索了第二种方法
第二种方法涉及组织样本或淋巴细胞初始注入低温防腐剂、冷冻、破解直到熔化最后,固定细胞脱水使用这一特殊方法调查哺乳类组织、胡萝卜原型细胞和叶体细胞
app亚博体育Fracure电显微镜设备
上头fracure系统LecaEMACE900app亚博体育有效设备处理过程LeicaEMACE900样本编译系统可执行冻结分片、冷刻和电子波束涂层而不使用额外工具
Ultrapid冷冻是什么
几类低湿度样本可通过正常沉浸冷有效保存而无需事先冷冻处理,但在多数情况下快速冷冻需要超速冷冻程序这些程序意在大幅度提高标本冷却率,以防止非预处理样本中发生的冰晶变质最优滑动冷冻、喷射冷冻是超快速冷冻程序
最新研究
日志最新研究星际协议FEM描述如何定位Phosthatidcholinedcho综合自流自流密钥复用磷方法包括管理可点击含alkyne类比淋巴细胞、快速解冻、冻结裂变复制制作、并发和免疫标签这种方法可用于量化哪些屏障斜翼新生成ptcho集成
近段时间里,正在研发冷冻断片显微技术新方法,如高压冷冻技术方法将克服传统限制,为研究基因学、生物工程和医学领域者铺路
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参考并深入阅读
津治 台木 藤元2021超结构化合成磷化物细胞通过冷冻裂变电子显微镜STAR协议2(4)10990可用地址 :亚博老虎机网登录https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2666166721006961?via%3Dihub
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可用地址 :https://www.leica-microsystems.com/products/sample-preparation-for-electron-microscopy/p/leica-em-ace900/
Meier Carola和Anja Beckmann2018年冻结断裂:超结构分析体外单元新渠道历史化学和细胞生物149(1).3-13可用地址 :https://link.springer.com/article/10.1007/s00418-017-1617-x
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塞弗斯Nicholas J2007年阻塞电子显微镜自然协议2(3)547-576可用地址 :yabo214https://www.nature.com/articles/nprot.2007.55
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