健壮的色谱分析婴儿配方的维生素b

水溶性维生素(WSV),主要由复合维生素B,许多食品的主要成分,特别是在婴儿配方。这些维生素代谢途径的关键作用,因此,继电器相当大的健康益处当引入到我们的日常饮食。

对人类有每日营养建议有关这些维生素作为建立独立的测试实验室,美国食品和药物管理局(FDA)和食品制造商和补充,能够定量地验证这些产品中的维生素含量是至关重要的。

这可能是特别具有挑战性的评估强化食品时由于维生素浓度变量的范围,同时保持每日津贴(见表1)。

表1。日常所需的值(DV)为每个分析维生素。来源:PerkinElmer食品安全和质量

维生素 DV(每日所需的价值;毫克;每FDA指南1)
B3(烟酸) 20.
B6 2
B3 *(烟酰胺) 不可用
B1 1.5
B9 0.4
B7 0.3
B12 0.006
B2 1.7

例如,在婴儿牛奶、维生素B12(维生素B12)出席1 - 2磅,而维生素B2(核黄素)出席1000倍浓度(1 - 2 ppm)。因此,任何定量分析过程必须有能力来适应这个伟大的浓度差异。

这里,质/ MS方法给出了定量分析的维生素b在一个单一的运行。维生素分析包括维生素B1, B2(核黄素),B3(烟酸),B3 *(烟酰胺),B6(吡哆醇)、B7(生物素),B9(叶酸)和维生素B12(维生素B12),利用三个内部标准。

基本液体提取用于提取从婴儿配方的维生素。样本提取与快速分析方法(< 6分钟)被认为是可靠的、健壮的和最耗时的。

实验

硬件/软件

一个PerkinElmer阿尔特斯™UPLC®系统结合了阿尔特斯30溶剂/样本模块,集成真空脱气装置和列加热器用于色谱分离。检测,PerkinElmer QSight™210 MS / MS探测器使用。仪器管理、分析和数据处理进行了使用简单3 q™软件平台。

方法参数

LC和MS / MS方法参数显示在表2和3,分别。

表2。LC方法参数。来源:PerkinElmer食品安全和质量

。 。
列 PerkinElmer阿尔特斯UPLC®本·C18, 1.7µm, 2.1 x 50毫米(# N2972000部分)
流动相 溶剂:5毫米甲酸铵,用甲酸pH值为4.9
溶剂B:乙腈(ACN)
时间(分钟) 流量(毫升/分钟) %的 % B 曲线
1 最初的 0.5 100.0 0.0
2 1.60 0.5 100.0 0.0 6
3 4.50 0.5 70.0 30.0 6
4 5.00 0.5 50.0 50.0 6
5 6.00 0.5 50.0 50.0 6
6 6.05 0.5 100.0 0.0 6
分析时间 6分钟;re-equilibration时间:4分钟
压力 6900 psi / 460条(最大)
烤箱温度。 40ºC
注入量 3µL

表3。MS / MS参数。来源:PerkinElmer食品安全和质量

。 。 。 。 。 。
电离模式: ESI -积极
干燥气体(氮气) 75年 HSID临时 320°C; 电喷射V1 5000 V

擅长。组1
(0.20 - 0.85分钟)		 MRM转换(12)
量词
离子		 限定符
离子		 电动汽车 CE (V) 保压时间
(毫秒)
B3(烟酸) 124.3/80.2 124.3/53.2 55 -30年 One hundred.

擅长。组2
(0.7 - 2.5分钟)		 MRM转换(12)
量词
离子		 限定符
离子		 电动汽车 CE (V) 保压时间
(毫秒)
B1(硫胺素) 265.0/121.7 265.0/144.0 20. -25年 50
B1”(硫胺素;13C4C8H17N4操作系统+) 269.0/122.0 20. -25年 50
B3 *(烟酰胺) 123.3/80.2 123.3/53.2 25 -30年 50
B6(吡哆醇) 170.3/133.7 170.3/105.8 22 -28年 50

擅长。组3
(3.0 - 4.4分钟)		 MRM转换(12)
量词
离子		 限定符
离子		 电动汽车 CE (V) 保压时间
(毫秒)
B7(生物素) 245.0/96.4 245.0/104.5 24 -45年 35
B7(生物素;C10D2H14N2O3S) 247.0/98.7 24 -45年 35
B9(叶酸) 442.1/295.2 442.1/176.0 21 -22年 35
B12(维生素B12): 678.9/147.2 678.9/399.2 23 -45年 35
B2(核黄素) 377.0/172.3 377.0/198.2 35 -48年 35
B2(核黄素;13C4C13H20.15N2N2O6) 383.0/175.4 35 -48年 35

EV =入口电压;CE (V) =碰撞能量

溶剂、标准和样品制备

HPLC-grade溶剂、试剂和稀释剂使用,通过0.22 -µm尼龙过滤器过滤。稀释,5毫米甲酸铵、修改与10%甲酸pH值4.9,使用。

所有的维他命b标准,包括B1, B2(核黄素),B3(烟酸),B3 *(烟酰胺),B6(吡哆醇)、B7(生物素),B9(叶酸),从Sigma-Aldrich B12(维生素B12)收购®公司,密苏里州的圣路易。

三个内部标准用于校准和定量目的:维生素B1”(硫胺素;13C4C8H17N4操作系统+),B7(生物素;C10D2H14N2O3年代)和B2(核黄素;13C4C13H20.15N2N2O6),都从Sigma-Aldrich获得®公司。

B1”是用于校准的B3, B3 *, B6和B1、B2的用于B2。B7”是用于B7、B9和B12。样品分析包括两个市售婴儿配方粉,i标记,如果。

防止可能的标准或样品不稳定,所有股票和工作标准都保存在制冷机组,直到使用;所有准备样品在四小时内评估,只有琥珀2毫升LC瓶。所有calibrants和样本使用0.22 -µm尼龙过滤器过滤。

实验

标准制剂

制备40-µg /毫升股票的标准B2, B9和B7在250毫升容量瓶完成。三种维生素溶解最好在基本条件下,50毫升的0.05%氢氧化铵(NH)4哦)被介绍给烧瓶,当时动摇,直到标准完全溶解。

Dilutent当时涌来填补瓶指定的标志。准备40-µg /毫升股票标准B3, B3 *, B6和B1和5-µg /毫升股票的B12水平进行连续使用稀释剂。

25毫升的三种股票的解决方案+ 25毫升的稀释剂被加入100毫升容量瓶的工作标准。震动过程后,瓶然后放入冰箱储存。

这工作标准也充当了6级calibrant,包括10µg /毫升每个维生素,除了B12, 1.50µg /毫升。

内部标准股票的解决方案(ISTDs)准备的每个同位素维生素的全部内容标准,如下:2毫克的B1”、5毫克的B7”和1毫克B2的传递到20毫升,250 ml和10毫升容量瓶,分别。

为了支持解散,B1和B2的标准最初是转移到每个瓶通过5 x 1毫升0.05% NH的冲洗4哦。稀释剂注入三烧瓶是马克。随之而来的股票浓度100µg /毫升B1和B2和20µg /毫升B7”。

六个校准水平是由连续稀释的工作标准。结果维生素浓度如表4所示。

表4。维生素B的浓度在每个校准水平。来源:PerkinElmer食品安全和质量

校准水平 浓缩的。B1, B3, B3 *,
B6, B7 B9和B2(µg /毫升)		 浓缩的。的B12
(µg /毫升)
1 0.004 0.0005
2 0.02 0.0025
3 0.10 0.0125
4 0.40 0.050
5 2.00 0.250
6 10.00 * * 1.250

* * 6级不是用于B1, B3, B6和B9。

维生素B12是校准使用更低浓度范围由于其具有大大降低DV指南(0.006毫克)。运行每一批之前,50毫升每个calibrant级别的倒到50毫升容量瓶然后飙升至0.1µg /毫升与内部标准的50µL ISTDs B1和B2和250µL ISTD B7”。

注意:如果不到50毫升的任何calibrant级别访问,ISTDs应该比例添加到可用的体积。所有calibrants都注入了一式三份。

样品制备

两个婴儿配方粉的制备(标记为IF1and如果)完成首先考虑了必要数量的每个粉成配衡的50毫升离心管,然后添加20毫升的稀释剂。所需的金额使用的推荐比例成立powder-to-water发表要求每个产品的标签。

15分钟,每个离心管pulse-vortexed于是飙升至0.2µg /毫升的解决方案与内部标准通过引入40µL ISTDs B1和B2和200µL ISTD B7”。

在以下赔偿2倍稀释样品制备过程样本µg /毫升ISTD飙升到0.2。20毫升的乙腈,酸化10µL 10%甲酸,然后引入每个管。

随后这个过程,进行了五分钟的脉冲涡流和离心10分钟每分钟7800转。

的酸化ACN蛋白质崩溃/降水引起的,它允许用户消除脂肪通过离心/固体材料。10.0毫升的上层清液然后仔细从三种管转移到个人50毫升离心管和干~ 1毫升。

每个管充满了稀释10毫升马克,然后pulse-vortexed三分钟,最后在7800转离心5分钟。1毫升每个上层清液过滤成2毫升瓶。所有样品都注入了一式三份。

结果与讨论

利用规定的方法参数,图1显示一个覆盖12复制的复合量词mrm 5级calibrant。所有八个维生素是解决好,在四分钟内淋洗,12-replicate覆盖表现出特殊的色谱测定重现性。

12复制覆盖的量词mrm的5级calibrant。

图1所示。12复制覆盖的量词mrm的5级calibrant。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

图2显示维生素B1、B12的校准结果的例子,展示优秀的适合(R2 =≥0.999;n = 3)。维生素B2、B3 * B7和B12, 6级使用校准。相比之下,一个5级校准用于维生素B1, B3, B6和B9。

校准结果B12维生素B1 (a)和(b);

图2。校准结果B12维生素B1 (a)和(b);在每个级别n = 3。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

所有八个维生素校准符合> 0.996。在注入稀释剂的空白一式三份后立即注射6级calibrant,没有见过任何检测结转的八个维生素。延滞的测试结果的一个例子对维生素B12 B1and如图3所示

结转测试MRM维生素B1、B12: 3复制注射6级calibrant稀释剂空白紧随其后。

图3。结转测试MRM维生素B1、B12: 3复制注射6级calibrant稀释剂空白紧随其后。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

图4显示了量词mrm quantitatable最低级别的每个分析物。维生素B1、B2、B3 *和B6都可测到0.004µg /毫升(4磅)和维生素B12可测到0.0005µg /毫升(0.5磅)。

量词mrm的量化水平最低的八个维生素。

图4。量词mrm的量化水平最低的八个维生素。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

维生素B3和B9可测到0.02µg /毫升(20磅)。预期内的所有分析维生素是可衡量的FDA规定的指导方针。quantitatable限制(定量限或IDL)维生素B1、B6和B2可能会低得多。

两市售婴儿配方粉,i,如果八维生素b进行了分析。每个样本准备详细的上面和注射一式三份。

图5 - 6显示每个维生素中观察到的个体量词mrm婴儿配方奶粉样品准备。两个示例配置文件似乎相似,这是可以预料到的,记住为这种类型的产品,标签索赔通常是相似的。

量词mrm 8维生素b i。

图5。量词mrm 8维生素b i。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

量词mrm如果8维生素b。

图6。量词mrm如果8维生素b。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

样品重现性如图7所示,展示了复制mrm如果维生素B2和B12。的重现性非常低1 - 2磅的维生素B12水平尤其令人印象深刻。

复制量词mrm B12维生素B2 (a)和(b)如果。

图7。复制量词mrm B12维生素B2 (a)和(b)如果。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

是显示在表5中,除了维生素B1in i,维生素b的浓度计算都是在一个适当的目标范围内的标签要求的婴儿配方奶粉。特定标签索赔值B3(烟酸)和B3 *(烟酰胺)没有观察到这两种维生素通常结合和分组下“B3”还是“烟酸”。

表5所示。维生素b在i和如果发现,定量结果与标签要求;n = 3。来源:PerkinElmer食品安全和质量

维生素 RT(分钟) i 如果
浓缩的。每个标签索赔(µg /毫升) 实际样品浓缩的。* *(µg /毫升) 区别标签索赔(±%) 浓缩的。每个标签索赔(µg /毫升) 实际样品浓缩的。* *(µg /毫升) 区别标签索赔(±%)
B3 0.457 NA 0.020 - - - NA 0.029 - - -
B6 0.904 0.450 0.42 - 6.7 0.405 0.30 - 25.9
B3 * 1.097 NA 2.56 - - - NA 2.35 - - -
B1 1.305 1.50 0.80 - 47 0.643 0.70 + 8.9
B9 3.180 0.195 0.17 - 12.8 0.103 0.13 + 20.1
B7 3.540 0.038 0.040 + 5.3 0.030 0.033 + 10.0
B12 3.814 0.002 0.002 0.0 0.002 0.002 0.0
B2 3.954 1.50 1.61 + 7.3 1.029 0.98 - 4.8

* *平均三个复制

这两个inter-convert维生素是公认的能力,使quantitatable比较困难。2维生素B1的低价值i真正可能是真实的,如果接近的值的标签要求,甚至偏高,显示良好的维生素B1复苏的预期。

总的来说,结果支持优秀的恢复性能符合为婴儿配方提供了样品制备过程。提供额外的分析物的确认,限定符/量词离子比率也成立。

如表6所示,这quantitatable维生素的离子比率发现在婴儿配方奶粉中都被认为是宽容窗口(±20%)离子比例确定的标准。烟酸(B3)被发现浓度比例过低,任何维生素B3,被确认是主要烟酰胺(B3 *)。

表6所示。分析物离子比i和相应标准的水平。来源:PerkinElmer食品安全和质量

维生素 mrm用于离子比(12) 离子比例 %的差异(±)
i 标准
B3 * 123.3/53.2
123.3/80.2		 0.165 0.158 + 4.4
B6 170.3/105.8
170.3/133.7		 0.046 0.045 + 2.2
B1 265.0/144.0
265.0/121.7		 0.241 0.241 0.0
B9 442.1/176.0
442.1/295.2		 0.473 0.478 - 1.0
B7 245.0/104.5
245.0/96.4		 0.692 0.752 - 7.8
B12 678.9/399.2
678.9/147.2		 0.773 0.642 + 20
B2 377.0/198.2
377.0/172.3		 0.802 0.773 + 3.8

结论

结果,验证的相关性质/ MS方法高效,常规和健壮的色谱评价婴幼儿配方奶粉中维生素b。

女士,这是通过使用一个方法来建立和测量八水溶性维生素在一个广泛的浓度范围在不到四分钟。展示优秀的保留时间的重复性,结果和方法有能力检测维生素B12十亿分之0.5,远低于预期水平的~ 2磅的婴儿配方。

引用

  1. 美国食品和药物管理局(FDA),指导行业:食品标签指南(14。附录F),http://www.fda.gov/Food/GuidanceRegulation/GuidanceDocumentsRegulatoryInformation/labelingnutrition/ucm064928.htm
  2. 尼克•伯德姆登的未来,联合王国

这些信息已经采购,审核并改编自PerkinElmer食品安全和质量提供的材料。亚博网站下载

在这个来源的更多信息,请访问PerkinElmer食品安全和质量。

引用

请使用以下格式之一本文引用你的文章,论文或报告:

  • 美国心理学协会

    PerkinElmer食品安全和质量。(2021年8月11日)。健壮的色谱分析婴儿配方的维生素b。AZoM。检索2022年8月12日,来自//www.washintong.com/article.aspx?ArticleID=20648。

  • MLA

    PerkinElmer食品安全和质量。“婴儿配方奶粉中维生素b的健壮的色谱分析”。AZoM。2022年8月12日。< //www.washintong.com/article.aspx?ArticleID=20648 >。

  • 芝加哥

    PerkinElmer食品安全和质量。“婴儿配方奶粉中维生素b的健壮的色谱分析”。AZoM。//www.washintong.com/article.aspx?ArticleID=20648。(8月12日访问,2022)。

  • 哈佛大学

    PerkinElmer食品安全和质量》2021。健壮的色谱分析婴儿配方的维生素b。AZoM,认为2022年8月12日,//www.washintong.com/article.aspx?ArticleID=20648。

问一个问题

你有一个问题你想问关于这篇文章?

离开你的反馈
(注销)
你的评论类型
提交

从PerkinElmer食品安全和质量更多的内容

看到所有的内容PerkinElmer食品安全和质量