快速和健壮的色谱分离和定量的四糖

枫糖浆是一种广泛使用的天然甜味剂和定义由美国食品和药物管理局(FDA)作为液态食品得到了集中和热处理sap的枫树。¹

枫糖浆的主要糖是蔗糖,而较小的大量的果糖,葡萄糖和复合碳水化合物也在场。²可溶性总糖含量的枫糖浆是经常决定通过蔗糖的礼物——其他糖类不考虑。²

枫糖浆还包括一系列的其他组件,例如,维生素、矿物质、有机酸、氨基酸和激素。³糖成分不同于蜂蜜,这在很大程度上是由果糖和葡萄糖,较小的麦芽糖等糖和蔗糖的浓度。³

单糖通常使用进行分析高效液相色谱法(高效液相色谱)。亲水相互作用色谱法(HILIC)也经常采用与折射率(RI)检测。这是由于糖的极性和缺乏一个合适的发色团的紫外检测。

本文概述了一个简单的HILIC-RI方法适合分析四糖通常发现在枫糖浆。图1显示的结构这四个糖。

图1所示。化学结构的四糖分析研究。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

实验

硬件和软件

PerkinElmer LC 300高效液相色谱系统用于色谱分离。这是一个由LC 300 10 k 300 psi泵和一个LC autosampler配备一个完整的柱温箱。

一个LC 300折射指数(RI)检测器用于检测,而简单™铬CDS软件平台是用于仪器控制、分析和数据处理。

方法参数

表1显示了相关的LC参数。

表1。LC参数。来源:PerkinElmer食品安全和质量

。	。
列	PerkinElmer Brownlee分析氨基酸, 3μm 150 x 4.6毫米(# N9303501部分)
流动相	溶剂:25乙腈:水 溶剂计划:权力平等主义的 一步 时间 (最小值)。 流量 (毫升/分钟)。 %的 % B 1 0.00 1.5 One hundred. 0 2 6.00 1.5 One hundred. 0
数据收集率	5分/秒(赫兹)
分析时间	6分钟。
压力	2100 psi / 145酒吧最大
国际扶轮细胞临时流动。	35ºC
烤箱温度。	35ºC
注入卷。	10μL(部分循环)

溶剂、标准和样品

溶剂和稀释剂都是高效液相色谱级。标准和样品提取物稀释准备使用25乙腈:水,除非另有说明。

四糖标准——果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖,是从Sigma-Aldrich获得的^®公司(密苏里州圣路易斯。这些都是作为粉末提供。

5毫克/毫升股票标准混合溶液制备,也担任过7级校准标准。这是由溶解250毫克的每个标准50毫升容量瓶。1:1的甲醇:水的稀释剂被用来确保完全溶解。

更多的calibrants准备。这是由连续稀释的标准混合浓度水平的2.5,1.25,0.625,0.3125,0.15625和0.078125毫克/毫升,用流动相(25乙腈:水)为了提供一套7-level校准。

的调味糖浆被苹果收购了当地的农贸市场,和两种不同品牌的品位黑琥珀枫糖浆是获得从一个当地的杂货店。

大约0.75毫升的糖浆是用移液器吸取到一个配衡的50毫升离心管获得一个精确的样品重量。总共25毫升的水还补充道,和样本用25分钟。

样本然后使用0.45µm尼龙过滤器过滤(# 02542880)部分,用流动相稀释10倍。这样做是注射前10µL进行分析。

结果与讨论

图2显示0.625毫克/毫升的色谱标准。所有四个糖筛选了不到5分钟。

图2。色谱图0.625毫克/毫升糖的标准。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

图3显示了10个复制的覆盖0.625毫克/毫升糖标准注射,显示良好的重现性。保留时间% rsd为被发现在0.07%以下,而峰面积百分比为每个分析物被发现在0.5%以下。

图3。色谱覆盖0.625毫克/毫升糖10复制的标准。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

图4显示校准结果四糖的浓度范围0.078125 - 5毫克/毫升。所有的糖是一个线性(一阶)符合R²系数是0.999以上(n = 3在每个级别)。

图4。7-level校准的结果集的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

表2。钟表和定量限四个分析物,为了洗脱。来源:PerkinElmer食品安全和质量

被分析物	计算LOD(毫克/毫升)	计算定量限(毫克/毫升)
果糖	0.006	0.022
葡萄糖	0.039	0.131
蔗糖	0.015	0.050
麦芽糖	0.015	0.050

表2特性检测的极限(LOD)和定量限度为每个分析物(定量限)。这些都是计算使用每个响应的标准偏差和每个分析物的校准曲线的斜率。这些也是基于一式三份注射的一级标准。

图5。色谱的糖浆a。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

图6。色谱的糖浆。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

图7。色谱的糖浆c。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

三个糖浆样品使用相同的色谱条件进行了分析。色谱结果糖浆A, B和C是显示在图5中,分别6和7。

糖浆剂A和B是A级暗琥珀枫糖浆,专门购买了这项研究。正如预期的那样,最显著的成分是蔗糖,显示在3.45分钟。

糖浆C是五香苹果糖浆(图7),突出了不同的色谱配置文件,可以看到两座山峰除了蔗糖峰值在糖浆A和B。

图8。重叠色谱糖浆C(蓝色)和0.625毫克/毫升标准(黑)。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

仔细检查通过色谱覆盖0.625毫克/毫升糖标准(图8)显示额外的峰代表果糖和葡萄糖。

表3。糖糖(mg)和百分比(w / w)三种糖浆进行了分析。数量是基于三个注射的平均值。来源:PerkinElmer食品安全和质量

糖浆;样品重量:637.1毫克
被分析物	数量(毫克)	糖的百分比(w / w)
果糖	跟踪	n /一个
蔗糖	跟踪	n /一个
葡萄糖	338.19	53.08
糖浆B;样品重量:886.6毫克
被分析物	数量(毫克)	糖的百分比(w / w)
果糖	跟踪	n /一个
蔗糖	跟踪	n /一个
葡萄糖	477.71	53.88
糖浆C;样品重量:831.41毫克
被分析物	数量(毫克)	糖的百分比(w / w)
果糖	53.46	6.43
蔗糖	45.95	5.53
葡萄糖	350.91	42.21

表3显示了每个糖浆样本定量结果。这些都是基于标准校准。

糖浆剂A和B被发现含有定量的蔗糖,但微量的葡萄糖和果糖也观察到以下检测极限——这些都是,因此,不考虑任何计算。

糖浆C被发现含有葡萄糖和果糖的浓度远远高于糖浆A和B,可能是因为苹果用于糖浆的生产。

的总重量百分比糖糖浆C被发现54.17%,接近其他两个枫糖浆完全基于蔗糖的含量。

结论

这项研究展示了PerkinElmer LC 300高效液相色谱系统与国际扶轮检测潜在的快速和健壮的色谱分离和定量的四糖。

所有的结果表现出优秀的保留时间的重复性,以及很好的线性测试浓度范围。该方法提供了定量限≤0.1 mg / mL的几乎每个分析物。

本研究涉及糖分析三个不同的糖浆——一个五香苹果糖浆从当地农贸市场和两个从本地杂货店枫糖浆。

该方法使每个糖浆中包含特定分析物的识别样本。它还促进糖比较概要,色谱和定量。

引用

1. 美国农业部的标准等级的枫糖浆,2015年3月。
2. Storz g;达尔维,a·g·;Albersheim, p .表征多糖分离枫糖浆。植物化学1986、437−441。
3. 球,d . w .枫糖浆的化学成分。j .化学。建造。2007、84、1647−1650。

确认

从材料最初由杰米从Perki亚博网站下载nElmer自由/开源软件,公司。

这些信息已经采购,审核并改编自PerkinElmer食品安全和质量提供的材料。亚博网站下载

在这个来源的更多信息,请访问PerkinElmer食品安全和质量。