生混合牛奶中β -内酰胺类和四环素的筛选试验

AuroFlow™PR1ME™BT Combo MRL Assay是一种具有竞争力的条带检测方法。它被专门设计用于快速检测生混合牛奶中残留的β-内酰胺。它也适用于一系列代谢物的检测，包括青霉素，头孢菌素和四环素。

该检测方法检测17种β-内酰胺(包括特定代谢物)和3种四环素，其水平低于欧洲MRLs，在7分钟内提供这些结果。

原理的方法

为了评估这些测试的稳健性，将原料奶样品在2-15°C下混合，以确保样品均匀性。

一根空管子插入AuroBLOCK™孵化器将200µL的牛奶加入试管中。接下来是插入箭头向下的试纸。

表1。仪器读数:对测试结果的解释。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

比(面积测量)	解释
≤1.00	负
< 1.00	积极的

图1所示。AuroFlow™PR1ME™BT Combo MRL检测试纸的目视解释图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

样品在50℃下孵育7分钟，然后从试管中取出试纸条。将β-内酰胺、头孢噻呋和四环素品系的浓度与对照品系的浓度进行比较，可以直观地解释结果。

还可以通过在QuickSTAR™条状测试阅读器中读取条状来评估结果，然后应用1.00的比值来表示截止值。如果某一抗生素检测线出现的强度低于对照线，则该样本可视为该抗生素阳性。

的AuroFlow™PR1ME™BT Combo MRL Assay测定15种β-内酰胺类和4种四环素类抗生素的预测检测能力(CCβ)。

不含抗生素的牛奶样品在不同浓度的抗生素中进行了强化处理。这些浓度均在最大残留限量(MRL)上下。

每个样品使用10至20个测试条(从一个批次)每个浓度进行测试。

检测能力的特点是一个牛奶样品的最低分析物浓度的测试，在20条测试中至少有19条是阳性结果。

按照《兽药筛选方法验证指南》(社区参考实验室20/01/2010)进行检测。此外，共检测了115份抗生素牛奶样本。

表2。按最大残留限量(MRL)检测的抗生素及每种抗生素的检测浓度。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

抗生素	欧盟推广(μg /公斤)	浓度测试(μg /公斤)
阿莫西林	4	1 2 3 4
氨苄青霉素	4	1 2 3 4
Cefacetrile	125
头孢洛宁	20.	4,6,8,20
头孢唑啉	50	25 50 60 75
头孢哌酮	50	1 1.5 2 3
Cefquinome	20.	5 10 15 20
Ceftiofur	One hundred.	10 20 30 100
Cefalexin	60	100 500 1000 1500
Cephapirin	60	4,5,6,60
邻氯青霉素	30.	2 3 4 30
双氯青霉素	30.	1 2 3 30
萘夫西林	30.	2 4 6 30
新青二	30.	2 3 4 30
Desfuroylceftiofur	One hundred.	10 20 30 100
青霉素G	4	1 2 3 4
Desacetylcephapirin	60	10 15 20 60
四环素	One hundred.	5 10 20 100
氧四环素	One hundred.	10 20 30 100
金霉素	One hundred.	10 20 30 100

亚博网站下载材料和方法

制备一系列100-250 mg/L的抗生素原液。这是使用USP级抗生素库存，这些是可用的- desfuroylceftiofur，和desacetylcephalin从多伦多研究化学。

Β-lactam原液在50:50 (% v/v)甲醇/水中制备，四环素在100% (ACS级)甲醇中制备。溶液被混合和超声，直到完全溶解在每个实例中。

每个文本使用单个牛奶样品(第91017OP号批号)，以一次性等价物的方式在-80°C下存储。aliquot在使用前解冻，并加强与适当浓度的抗生素原液。

使用Qiagen ESE Reader Plus对阳性和阴性样本进行检测，当抗生素与控制线比< 1.00时为阳性，当抗生素与控制线比≥1.00时为阴性。

结果

本研究生成了每种抗生素的剂量反应曲线。这是在MRL或MRL周围的不同浓度下产生的，利用线强度来确定检测限(LOD)。

图2到图21显示了对照线与每一类抗生素各自的线强度，从而突出了这种反应。

图2。阿莫西林与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图3。氨苄西林与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图4。头孢曲利与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图5。头孢氯铵与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图6。头孢唑林与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图7。头孢哌酮与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图8。头孢喹诺与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图9。头孢噻呋与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图10。头孢氨苄与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图11。头孢匹林与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图12。氯唑西林与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图13。双氯青霉素与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图14。Nafcillin与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图15。苯唑西林与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图16。降氟硫脲与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图17。青霉素G与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图18。去乙酰头匹林与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图19所示。四环素与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图20。土霉素与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

图21。金霉素与对照的剂量反应曲线。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

每一种抗生素的LOD计算为有95%阳性结果的最低检测浓度(表3)。为了确保重现性，进一步检测了115份阴性牛奶样品(表4)。

表3。AuroFlow™PR1ME™BT Combo的检测极限能力。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

抗生素	欧盟推广(μg /公斤)	检出限(LOD)
阿莫西林	4	3.5 - 4
氨苄青霉素	4	3.
Cefacetrile	125	20.
头孢洛宁	20.	8
头孢唑啉	50	40
头孢哌酮	50	2
Cefquinome	20.	12 - 15
Ceftiofur	One hundred.	20.
Cefalexin	60	1100
Cephapirin	60	5－6
邻氯青霉素	30.	3.
双氯青霉素	30.	2
萘夫西林	30.	5－6
新青二	30.	3.
Desfuroylceftiofur	One hundred.	30.
青霉素G	4	2
Desacetylcephapirin	60	18 - 20
四环素	One hundred.	12 - 15
氧四环素	One hundred.	30.
金霉素	One hundred.	20 - 30

表4。AuroFlow™PR1ME™BT组合试纸条上每条线上检测115个阴性牛奶样品的平均线强度和比率。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

行强度(mV)
	控制	Ceftiofur	Beta-lactam	四环素
平均	217.5	449.3	449.8	428.8
SD	13.4	28．2	23.7	35.1
%的简历	6．2	６．３	5．3	8．2

比
	Ceftiofur	Beta-lactam	四环素
平均	449.3	449.8	428.8
SD	28．2	23.7	35.1
%的简历	６．３	5．3	8．2

结论

的AuroFlow™PR1ME™BT Combo MRL Assay能检测14种β-内酰胺类抗生素，达到欧洲MRL水平。它能检测MRL水平以下的头孢噻福和头孢普林的代谢物，并能检测欧洲MRL规定的所有3种四环素类抗生素。

验证结果证实，AuroFlow™PR1ME™BT Combo MRL Assay是用户筛选生混合牛奶中β-内酰胺和四环素测试的理想解决方案。

致谢

由来自PerkinElmer亚博网站下载, Inc.的Nicolas Kosa原创的材料制作。

这些信息来源于PerkinElmer食品安全和质量公司提供的材料。亚博网站下载

有关此来源的更多信息，请访问PerkinElmer食品安全和质量。