在畜牧业中使用抗生素是为了预防或治疗牲畜疾病，提高生产率。
在动物身上广泛使用抗生素的做法可能会产生以下几种后果:
-
食物污染事件
-
会对环境造成残留
-
对人类健康的不利影响
-
对抗生素有耐药性的细菌菌株的出现
在养蜂业，磺胺类药物是治疗美国和欧洲的蜂病(一种感染蜜蜂的疾病)最常用的抗生素。
污孵会导致蜂蜜被污染磺胺类药．因此，迫切需要建立一种快速、一致、有效的蜂蜜中磺胺类药物的定量方法。本文概述了这样一种方法。
样品制备
样品的提取和清理方法如下:
-
将重达5克的蜂蜜样品放入150ml烧杯中。
-
加入25ml pH为2.0的磷酸溶液。
-
所产生的溶液被漩涡和混合，直到蜂蜜完全溶解。
样品清理涉及:
-
将溶解后的样品以约2ml /min的流速装入预处理的芳香烃磺酸阳离子交换盒中。
-
用5ml pH为2的磷酸溶液和5ml水清洗墨盒。
-
用40ml磷酸钾缓冲液(0.2 mol/L, pH=8)洗脱墨盒中的分析物。
-
向洗脱液中加入1.5 ml的庚磺酸钠溶液(0.5 mol/L)。
-
加入磷酸可将pH调至6。
-
然后将得到的溶液以约2ml /min的流速装入HLB药盒(该药盒已经过预处理)。
-
用3ml水清洗墨盒并在真空条件下干燥。
-
用10ml甲醇从墨盒中洗脱分析物。
-
洗脱液蒸发至干燥，残渣溶解在1ml流动相A中。
实验
硬件和软件
一个PerkinElmer QSight®采用210 UHPLC-MS/MS系统对分析物进行分离检测。所有的仪器控制以及分析和数据处理程序都采用了Simplicity 3Q™软件平台。
方法参数
的方法参数LC和MS / MS分别见表1和表2。
表1。LC方法参数。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司
| ． |
． |
| 流动相: |
溶剂:含0.1%甲酸(FA)的水
溶剂B:乙腈(ACN)
|
时间(分钟) |
流量(毫升/分钟) |
%的 |
% B |
曲线 |
| 1 |
最初的 |
0．4 |
90 |
10 |
| 2 |
1．00 |
0．4 |
90 |
10 |
6 |
| 3. |
4.00 |
0．4 |
70 |
30. |
6 |
| 4 |
5．00 |
0．4 |
70 |
30. |
6 |
| 5 |
6．00 |
0．4 |
10 |
90 |
6 |
| 6 |
6．50 |
0．4 |
10 |
90 |
6 |
| 7 |
7．00 |
0．4 |
90 |
10 |
6 |
| 8 |
9.00 |
0．4 |
90 |
10 |
6 |
|
| 烤箱温度。 |
40ºC |
| 注入体积: |
3μL |
表2。分析物的MS/MS参数和保留时间。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司
| 离子源 |
应急服务国际公司积极 |
| 电喷射/ V |
4500 |
| 加热气体温度/°C |
500 |
| HSID临时/°C |
320 |
| 干气 |
200 |
| 喷雾器气体 |
180 |
| 分析物 |
RT |
前体离子/生成物离子 |
电动汽车(入口电压) |
CC(碰撞能量) |
前体离子/产物离子2 |
电动汽车 |
CC |
| 磺胺嘧啶 |
1.34 |
251.2/156.1 |
28 |
-21年 |
251.2/92.2 |
22 |
－40 |
| 磺胺噻唑 |
1.63 |
256.1/156.1 |
26 |
－20 |
256.1/108.1 |
25 |
－40 |
| 磺胺嘧啶 |
1.77 |
250.2/156.1 |
24 |
-24年 |
250.2/184.1 |
28 |
-24年 |
| Sulfisoxazole |
2.65 |
268.1/156.1 |
27 |
-21年 |
268.1/113.2 |
26 |
-29年 |
| Sulfamethizole |
2.86 |
271.1/156.1 |
19 |
－20 |
271.1/108.0 |
25 |
-38年 |
| 磺胺甲嘧啶 |
3.02 |
279.2/186.1 |
18 |
-24年 |
279.2/156.1 |
18 |
-25年 |
| Sulfachloropyidazine |
3.66 |
285.1/156.1 |
23 |
-23年 |
285.1/108.1 |
21 |
-37年 |
| 磺胺甲恶唑 |
3.79 |
254.2/156.1 |
29 |
-23年 |
254.2/108.1 |
28 |
-36年 |
| Sulfamonomethoxine |
4.15 |
281.0/155.8 |
19 |
-24年 |
281.0/108.0 |
30. |
-38年 |
| Sulfadimethoxine |
5．11 |
311.3/156.1 |
35 |
-27年 |
311.3/218.1 |
24 |
-26年 |
| 磺胺喹喔啉 |
5.18 |
301.1/156.1 |
22 |
-23年 |
301.1/108.0 |
18 |
－40 |
结果
11种磺胺类药物在MRM转换模式下的总离子色谱图如图1所示。
图1所示。MRM转换模式分析了11种磺胺类药物的TIC。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量公司
表3总结了信号噪声比(0.02 ng/ml)，以及在蜂蜜中添加的单个磺胺类药物的回收率。
表3。分析物的信噪比为0.02 ng/mL，样品中分析物的回收率为0.02 μg/kg。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司
| 分析物 |
S/N在0.02 ng/mL |
回收率在0.02 μg/kg (%) |
| 磺胺嘧啶 |
18 |
81.6 |
| 磺胺噻唑 |
40 |
85.9 |
| 磺胺嘧啶 |
30. |
83.2 |
| Sulfisoxazole |
50 |
86.2 |
| Sulfamethizole |
One hundred. |
90.1 |
| 磺胺甲嘧啶 |
400 |
91.5 |
| Sulfachloropyidazine |
30. |
79.8 |
| 磺胺甲恶唑 |
30. |
81.1 |
| Sulfamonomethoxine |
20. |
77.5 |
| Sulfadimethoxine |
25 |
78.0 |
| 磺胺喹喔啉 |
40 |
80.7 |
表4。线性动态范围、回归系数、定量限和定量限的重现性。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司
| 分析物 |
线性动态范围 |
及系数(R2） |
定量限(ng / mL) |
LOQ n=6时的CV% |
| 磺胺嘧啶 |
0.01 ~ 10.0 |
0.9943 |
0．01 |
5.41 |
| 磺胺噻唑 |
0.01 ~ 10.0 |
0.9950 |
0．01 |
6.25 |
| 磺胺嘧啶 |
0.01 ~ 10.0 |
0.9936 |
0．01 |
4.77 |
| Sulfisoxazole |
0.01 ~ 10.0 |
0.9958 |
0．01 |
4.90 |
| Sulfamethizole |
0.01 ~ 10.0 |
0.9943 |
0．01 |
3.22 |
| 磺胺甲嘧啶 |
0.01 ~ 10.0 |
0.9950 |
0．01 |
2．15 |
| Sulfachloropyidazine |
0.01 ~ 10.0 |
0.9948 |
0．01 |
6.54 |
| 磺胺甲恶唑 |
0.01 ~ 10.0 |
0.9934 |
0．01 |
7.03 |
| Sulfamonomethoxine |
0.01 ~ 10.0 |
0.9972 |
0．01 |
6.05 |
| Sulfadimethoxine |
0.01 ~ 10.0 |
0.9958 |
0．01 |
7．12 |
| 磺胺嘧啶 |
0.01 ~ 10.0 |
0.9959 |
0．01 |
5.79 |
采用外标标定曲线对蜂蜜中的磺酰亚胺进行了定量分析。这些是通过将0.1-10 ng/ml的标准品溶解在90%的水/ACN中产生的。
结果表明，在浓度范围内线性良好，回归系数为(R2)≥0.99。每种分析物的定量限(LOQ)为0.01 ng/ml。重现性好(CV<8%)。
结论
快速可靠UHPLC-MS / MS方法建立了测定蜂蜜中11种磺胺类药物的方法。萃取和清理样品制备方法显示样品中每个分析物有良好的回收率(>80%)。每种分析物的定量限为0.01 ng/ml(0.01µg/kg)。
欧盟共同体参考实验室(CRLs)指南文件建议，蜂蜜中磺胺类药物的最高浓度为50µg/kg。
使用这里概述的方法获得的loq远远低于这个水平。这表明，QSight 200系统为蜂蜜中磺胺类药物的分析提供了一个平台，既强劲又敏感。
致谢
由PerkinElmer公司亚博网站下载的质谱分析团队创作的原始材料制作而成。
这些信息来源于PerkinElmer食品安全和质量公司提供的材料。亚博网站下载
有关此来源的更多信息，请访问PerkinElmer食品安全和质量。