OD规格是对在某一波长被阻挡的光量的评估。
它是透射率的日志，或：
OD = 2-log（％t）
OD值是添加剂（如图1所示）。通过使用在405nm处的二向量滤波器的二向量滤波器在405nm处封闭的二向量滤波器，可以在405nm下封闭，在405nm下封闭的发射过滤器，如下图1所示，可以实现805nm处的OD值。
注意，在传统光谱仪上测量大约6或更多的OD值是高度复杂的。实际阻塞可以高于计算值，如下图所示。
图1所示。透射(左)和外径(右)显示发射和二色滤光片。这些测量值由一个对数变换联系起来。当%T值很低时，OD值就会很高。OD是一种可加性(右边绿色曲线)。右边的面板显示了发射过滤器的模型性能，说明可能存在更高的OD，特别是在较低的波长。
本文将举例说明如何在常规的流式细胞仪系统中确定必要的阻断水平。
流血细胞计数器用于识别1 - 15 μ m范围内的细胞和颗粒。yabo214通常使用激光散射和荧光来达到这一目的。样品以单个文件的形式通过检测系统，如图2所示。
图2。聚焦激光束（薰衣草卵形）的例证与样品相互作用在流式细胞仪中。灰色电池通过激光焦点向下移动。
常用的流式细胞仪激光是405 nm激光。它具有1米/秒的线性流速(在细胞计数系统中经常看到)，这意味着细胞或粒子中的任何一点都将接触到被照亮的体积(如上所示的淡紫色部分)约10毫秒。
使用100兆瓦的功率，利用下面的方程很容易确定样品中与荧光团相互作用的光子的数量。
其中时间(t)以秒为单位，功率(P)以瓦为单位，波长(λ)以米为单位。普朗克常数(h)为6.626x10-34Js，光速(c)为3 × 108 m/s。
本文假设在整个分析过程中，所有的光子都与荧光团接触。公司的成立光子密度在样品的焦体积方面将是一种更彻底的方法。
有〜2 * 1011光子在光束焦点中经过10µs的渡越时间。一些光碎片会穿过样品，一些会被弹性散射(Mie和Rayleigh散射离开细胞器)，一些会被非弹性散射(Raman散射)，一些会被吸收。
由于光化学或热量，或者可以显示为荧光，所吸收光的错位，或者可以作为荧光，其通常以直角与激光束和样品颗粒的行程方向看。yabo214对于这个例子，它可以进出纸张的平面。
最复杂的情况旨在阻止激光束并同时识别荧光的单个光子。
对于这种情况，检测荧光信号和堵塞2 * 1011405纳米的光子需要同时进行。第一个建议是，排放过滤器需要OD 11阻塞。
这种信念并非总是如此。由于OD值是附加的，如前所述，如果二向色和发射滤光器的阻塞值加起来以产生11的堵塞值，则可以实现足够的阻塞，但是有更多的元素需要考虑。
在实践中，可以使用较少量的阻挡，因为与原始激光束的散射光量通常比较较小。作为示例，如果散射1％的光被散射以识别该散射信号中的一个荧光光子，则阻塞要求将是OD9。
在大多数情况下，描述单个光子的识别很可能是不切实际的。当荧光探针使用10纳秒的标准荧光寿命时，单个荧光团可以在10µs的传输时间内吸收(或被激发)1000倍的光。
荧光团的量子产量(Φ)描述了系统能够识别并重新发射为荧光光子的吸收光子的数量。色氨酸的含量范围为0.2,FITC的含量范围为0.9(是最高的含量之一)。
使用中间值0.5的单个荧光团将产生500光子，转化为OD7的阻挡要求。很可能每个细胞、蛋白质或粒子都有一定数量的荧光团附着。这意味着发射的光子数量将会更高，从而进一步降低了阻挡的要求。
如果系统中不同的光没有得到很好的控制，则阻塞OD值应该更大。例如，如果外壳不耐光，光学系统中就会出现不受控制的反射。抗反射涂层可以解决这个问题，以及使用挡板和吸收材料。亚博网站下载
od经常过度指定，有助于额外的复杂性和涂层成本。如果采用时间考虑系统内部的所有光子，则将降低成本并且信号将被优化。
*一种更详细的方法是计算样品焦体积内的光子密度。
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