比率荧光指南

比率荧光法是一种测量发射光谱或激发的两个或两个以上波长的强度，以检测局部环境变化的方法。这通常通过使用对特定环境参数（如pH值、极性、粘度或离子浓度）敏感的专用探针来实现。

比率染料

使用比率染料定位探针敏感特性，如离子浓度，可以通过测量动力学或光谱来使用。

在Fura-2的光谱中，可以看到荧光激发有两个峰。这些峰直接反映了溶液中游离离子钙的结合。在高游离离子钙浓度下，340nm的激发峰相对较高。当游离离子钙浓度较低时，380nm处的激发峰相对于340nm处的激发峰增大。

图1。Fura-2在含0～3.4μM游离ca~（2+）溶液中的荧光激发光谱。（HORIBA PTI QuantaMaster系列，2017年）

通过检查这些峰的两个激发波长的强度比，可以看出这与细胞内游离离子钙浓度直接相关。

此外，通过测量在340 nm和380 nm下激发时在510 nm处的荧光比率，时间将提供溶液在钙离子浓度中如何变化的基于时间的曲线图。该方法用于测量细胞对游离离子钙的摄取。

荧光光谱

其他已经存在的探针荧光光谱其变化方式与物理性质相同，如其他离子（例如，钠、镁和钾）的浓度和溶剂极性pH值。

上图突出显示了这一比率，显示了细胞内钙对富含呋喃-2的心房细胞的反应。在这种情况下，通过检查随时间变化的两种强度之间的比率，可以将钙离子浓度与该动力学曲线关联起来。

图2。Fura-2对心房细胞钙离子反应的影响

本信息来源、审查和改编自HORIBA Scientific提供的材料。亚博网站下载

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