用折光指数检测器测定甘露糖和甘露寡糖

葡甘聚糖是葡萄糖和甘露糖的支链多糖。它们作为能量储备存在于几种植物中。魔芋根中含有大量的葡甘聚糖。

魔芋根制成的面粉有降低胆固醇等营养价值。由于它有刺激肠道友好细菌的能力，它被称为益生元¹．益生元是一种选择性发酵的成分，可以使胃肠道微生物菌群的活性和/或组成发生特殊变化，对宿主的健康有益²．

益生元是一种特殊的功能性食品。低聚糖的好处是，它们可以忍受整个胃肠道运输和到达胃肠道细菌^3.．部分水解葡甘露聚糖产生的葡甘露寡糖比纯葡甘露聚糖具有更好的益生元功能。

聚合度为5的葡寡糖的益生元效应优于聚合度为10的葡寡糖⁴．因此，部分酶解具有重要意义⁵．液相色谱法是一种检测裂解后样品的方法，用于近似聚合度和组成。

新AZURA掉2.1升测定其定量限(LOQ)。KNAUER Eurokat Na⁺考察了该柱对聚合度大于2的糖类的分离能力。以甘露寡糖和甘露糖的混合物作为试验底物，因为这些低聚糖可以作为水解产物的参考。

图1所示。被测糖类的化学结构(由Megazyme公司提供)

实验

样品制备

6种糖的标准溶液为12 mg/ml₂O_dd．所有六种糖的混合物，每一种浓度为2 mg/ml，通过45µm的过滤器。从这个标准混合物中，对校准点进行了8个1:2稀释步骤。

最终浓度为:2 mg/ml;1毫克/毫升;0.5毫克/毫升;0.25毫克/毫升;0.125毫克/毫升;0.0625毫克/毫升;0.03125毫克/毫升;0.015625毫克/毫升;0.0078125毫克/毫升。糖是从Megazyme购买的。

方法参数

专栏:	Eurokat Na+， 300 x 8毫米，10µm
洗脱液:	H2Odd
流量:	0.5毫升/分钟
注入体积:	10µl
柱温:	75°C
系统压力:	50条
检测方法:	国际扶轮
运行时间:	16分钟

测量了新KNAUER AZURA RID 2.1L的LOQ，并与KNAUER Smartline S2300 RI探测器进行了比较。KNAUER Eurokat Na⁺用色谱柱对混合糖进行分离，并将其作为试验底物。

制备了从2 mg/ml到0.0078125 mg/ml的一系列稀释剂，并测量了每种混合物中的糖的校准曲线。

结果

图2显示了使用Eurokat Na分离的甘露糖、甘露糖、甘露二糖、甘露戊糖、甘露糖和甘露六糖的混合物⁺列。甘露糖，甘露糖和甘露二糖作为基线。甘露糖几乎是基线分离的，而甘露六糖和甘露戊糖的峰值没有基线分离(图2)。

使用Smartline RI检测器S2300，该混合物的色谱图显示了类似的分离(数据未显示)。

图2。分离出的混合糖，每2 mg/ml, Eurokat Na⁺300 x 8毫米。

使用Smartline RI检测器S2300和AZURA RID 2.1L测定并比较了6种被测糖类的定量限。根据图3所示的校准图，确定噪声并根据峰值高度计算LOQ。

AZUAR RID 2.1L检测到的所有糖类的loq明显低于Smartline RI检测器S2300检测到的loq(图4)。

图3。所有六种被测糖类的校正图显示线性r²

图4。比较AZURA RID 2.1L(黑色条)和Smartline RI检测器S2300(白色条)对六种被测糖类的LOQ值

Smartline RI检测器S2300的定量限在65µg/ml到35µg/ml之间，而AZURA RID 2.1L的定量限在20µg/ml到8µm/ml之间。

AZURA RID 2.1L的LOQ比Smartline RI检测器S2300的LOQ低20%到38%，而Smartline RI检测器的灵敏度要高得多(图5)。

表1显示了所有被测糖类的总LOQ值。在15.6 g/ml每一种糖的条件下，测定4个重复的峰高的相对标准偏差(RSD)值。用RID 2.1L测定的供试糖的RSD值在0.52% ~ 3.33%之间，Smartline S2300的RSD值在2.52% ~ 7.61%之间。

这些结果强调了在低样品浓度下更准确的测量，并增加了AZURA RID 2.1L的灵敏度。

图5。Smartline RI检测器S2300和AZURA RID 2.1L值对所有六种糖类的LOQ比

表1。比较AZURA RID 2.1Land Smartline RI S2300在1:128稀释步(15.6 g/ml)下测定的所有糖的总计算限和%RSD(峰高)

糖类	掉2.1升		S2300
	在定量限µg / ml	RSD(高度)为15.6 g/ml	在定量限µg / ml	RSD(高度)为15.6 g/ml
甘露糖	20.35	1.67	67.72	6.74
Mannobiose	15.82	3．33	50.39	7.61
Mannotriose	14.09	2．11	43.49	6.38
Mannotetraose	8.77	0.58	40.02	5.30
Mannopentaose	12.79	1.07	36.93	5.66
Mannohexaose	14.15	０．５２	36.29	2.52

结论

KNAUER Eurokat Na⁺用柱分离了六种糖的混合物。甘露糖、甘露糖、甘露二糖和甘露糖为基线分离。新Knauer azura rid 2.1l用于检测，其定量限为10 - 20µg/ml。AZURA RID 2.1L的灵敏度是Smartline RI探测器S2300的4.5倍。

AZURA RID 2.1L与Eurokat Na结合⁺色谱柱是分离和鉴定聚合度在2 - 5之间的低聚糖的特殊工具。浓度可以测试特定的糖，低至10µg/ml。

Eurokat Na⁺适用于糖低聚物的分离。

有关更多信息，请参阅白皮书

推荐柱的物理性质

固定相	钠形式磺化交联苯乙烯-二乙烯基苯共聚物
颗粒大小	10µm
形式	球形
交联%	6
维	300 x 8毫米
订单号	30 gx210ekn

推荐的仪表

糖类分析需要等温高效液相色谱系统，配有自动进样器、柱箱、脱气器和折射率检测器。还可以提供其他配置。

描述	订单号
AZURA P 6.1L第四系高效液相色谱泵，不锈钢10ml	APH34EA
AZURA掉2.1升	ADD31
AZURA CT2.1柱恒温器	A05852
Autosampler 3950	A50070
AZURA洗脱托盘E 2.1L	AZC00
OpenLab CDS EZChrom版	A2600-1

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参考文献

1.水解魔芋葡甘聚糖作为益生元的潜在用途。J Sci Food Agric 87:1758-1766 (2007)

2.Roberfroid MB，《益生元:重新审视的概念》。营养科学(3增刊2):830S-7S。pmd17311983(2007年3月)

3.王志强，王志强，等。魔芋葡甘露聚糖寡糖的酶解制备及特性研究[j]。食品化学。59:12658-12666 (2011)

4.Liu D.， Shi B.， Chen J.， Wang H.， Cheng Y.， Zhang W. the Optimization of hydrolysis of glucomanos -oligosaccharide by ß-mannase by response surface methodology . Carbohydrate Polymers 93: 81-88 (2013)

5.van Zyl W. H. Rose S. H.， Trollope K.， Görgens J. F.真菌ß-甘露聚糖酶:甘露聚糖水解、异源生产和生物技术应用

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