静态光散射凝胶渗透色谱法(GPC)——尺寸排阻色谱法(SEC)gydF4y2Ba

经典光散射或静态光散射技术用来决定回转的分子半径和分子量。gydF4y2Ba

在静态光散射,一系列不同的技术与缩略词存在,如文化、lal, SLS, mal等等。每个技术略有不同,提供了大量的优点和缺点。在本文中,背后的理论和原则详细描述静态光散射。gydF4y2Ba

分子量和分子的大小gydF4y2Ba

分子量的定义是分子的摩尔质量检查。分子量的分布可以从几个方面来解释,但是一个常见的方法是利用M等分子量的时刻gydF4y2Ba_zgydF4y2Ba,米gydF4y2Ba_wgydF4y2Ba和MgydF4y2Ba_ngydF4y2Ba这代表z-averaged,体重,平均相对分子量,分别。使用这三种价值观,更好的理解整个可获得分子量分布。gydF4y2Ba

分子大小指的是分子的物理尺寸。一般来说,一个值是用来描述的尺寸,和这个值是指同等大小的球体的半径测量下的分子。回转半径(RgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba)和水力半径(RgydF4y2Ba_HgydF4y2Ba)是两个常用的分子大小的值。RgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba也称为RgydF4y2Ba_rmsgydF4y2Ba,通过测量静态光散射。gydF4y2Ba

静态光散射gydF4y2Ba

当一个粒子或分子与光轰炸,一部分光被吸收和复制的各个方向。可以利用光散射的原理来确定几个属性的分子。gydF4y2Ba

静态光散射(SLS)是一种利用光学的技术安排在这样一种信号检测或静态稳定。样品的分子量可以通过确定光的强度计算样品的分散情况其他常量是已知的。SLS测量可以执行在凝胶排阻层析法系统(SEC)或凝胶渗透色谱法(GPC)(图1)。gydF4y2Ba

图1所示。gydF4y2BaGPC /秒系统的示意图。脱气装置,泵,喷射循环和列与可选autosampler标准。分离后,分子是由一个或多个探测器测量序列。gydF4y2Ba

色谱系统消除了并发症准备和样品的方法进行了净化。SEC或GPC也有助于集成光散射数据与从浓度探测器获取的数据,以确定同时样品的浓度。示差折光检测器(RgydF4y2Ba )是常用的,但一个紫外线(UV)吸光度检测器也可以使用。gydF4y2Ba

光散射仪器gydF4y2Ba

四种类型的SLS工具可用,即文化、、lal, mal和混合、/拉尔。这些工具被描述在接下来的段落。gydF4y2Ba

直角光散射(、)探测器gydF4y2Ba

一、仪器是所有光散射设备中最简单的。它有能力来确定光的强度分布在90°入射电子束(图2)。然后测量样品的分子量的样品浓度和强度测量。齐姆图(图2),散射光的强度计算的轴和样本被认为是各向同性。SLS探测器的最简单形式,文化、检测器可以开发无任何复杂的光学。gydF4y2Ba

图2。gydF4y2Baa、探测器的示意图显示了流程流中传递的细胞。b .使用、时,德拜情节减少到一个点也被认为是在每一个角度,因此= 1 /兆瓦。gydF4y2Ba

、系统的优点如下:gydF4y2Ba

• 简单的SLS探测器gydF4y2Ba
• 措施精确分子量分子RgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba<≈15海里gydF4y2Ba
• 最小的流细胞吗gydF4y2Ba
• 良好的灵敏度和信噪比gydF4y2Ba
• 任何噪音或耀斑产生的折射率变化量是降低gydF4y2Ba
• 适用于测定蛋白质的分子量gydF4y2Ba

然而,文化、设备无法精确确定分子的分子量与RgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba>≈15海里。它可以测量只在90°。gydF4y2Ba

低光散射(lal)探测器gydF4y2Ba

lal探测器能够测量光的强度分散在一个角度接近0°(图3)。在这个技术,强度将在0°附近强度,因此估计分子量将接近准确的分子的分子量。gydF4y2Ba

图3。gydF4y2Baa . lal探测器的示意图显示流经过流细胞。b .使用拉尔时,德拜情节是减少到一个点接近轴,因此所有分子= 1 /兆瓦。gydF4y2Ba

拉尔法的优点如下;gydF4y2Ba

• 拉尔决定了散射光的强度接近的轴线齐姆图,因此估计分子量最高精度gydF4y2Ba
• 体积流量较低细胞gydF4y2Ba
• 决定了分子的分子量和高水平的精度gydF4y2Ba
• 措施以最低的角度gydF4y2Ba

然而,lal探测器不能用于确定RgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba由于散射光只在一个角被量化。与文化、探测器、lal探测器不受弱散射样品。gydF4y2Ba

、/ lal混合探测器gydF4y2Ba

、/ lal混合探测器将文化、和拉尔探测器集成为一个单元(图4)。齐姆图,文化、仪器是用来确定分子的大小小于≈15 nm上限的各向同性散射。gydF4y2Ba

图4。gydF4y2Baa .示意图、/ lal混合探测器显示流传递通过流细胞。b当使用、/ lal,德拜情节是减少到两个地方文化、价值最大化灵敏度用于各向同性散射。gydF4y2Ba

、/ lal混合探测器的优点是:gydF4y2Ba

• 将拉尔和文化、设备组合成一个单元gydF4y2Ba
• 使用、提高弱散射的敏感度gydF4y2Ba
• 使用lal改善anistropic散射的精度gydF4y2Ba
• 优秀的敏感性较小的和更大的分子gydF4y2Ba
• 维护的小流细胞拉尔和文化、探测器gydF4y2Ba
• 让RgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba来衡量gydF4y2Ba

然而,文化、/ lal混合探测器也有一定的局限性。SEC或GPC系统是不洁净的,拉尔的数据可以证明吵了。同时,计算RgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba有一个有限的精度。gydF4y2Ba

多角度光散射(mal)探测器gydF4y2Ba

mal探测器测量光的强度能够分散在许多角度(图5)。当这些点标注在齐姆图(图7 b),可以推断出一个合适的拟合线从这里回到0°和分子量可以确定。这条线的斜率开始允许精确计算的RgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba。gydF4y2Ba

图5。gydF4y2Baa . mal探测器的示意图显示流经过流细胞。b .使用发作时,德拜图完成后,外推回到0°。gydF4y2Ba

mal仪器的优点如下:gydF4y2Ba

• 测量散射光的强度分布在各种角度和外推回到0°gydF4y2Ba
• 测量分子的分子量的大小gydF4y2Ba
• 在多个角度测量结果中增加信心gydF4y2Ba
• 角度可以删除,如果必要的gydF4y2Ba
• 测量RgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba分子>≈15海里gydF4y2Ba

mal工具也有一些缺点。由于分子的实际结构和形状是不清楚,很难确定哪些外推模型和合适的会给正确的答案。此外,光学复杂性也增加了成本。gydF4y2Ba

在所有的技术中,拉尔工具允许精确测量大分子的分子量的影响,因为它有减少的趋势的角度依赖分散光也删除外推法的必要性。gydF4y2Ba

mal整个大小决定了分子量范围和提供了一个更好的理解的角度依赖分散光大分子大于10到15海里半径,使R的高质量和精确的测量gydF4y2Ba_ggydF4y2Ba。gydF4y2Ba

仪器校准gydF4y2Ba

都需要某种形式的校准光散射仪器,这可以表现在两个方面:分子量基于标准的校准和基于标准的校准。前方法校准所有光散射检测器同时使校准常数,峰加宽改正和inter-detector卷其他探测器同时量化。后一种方法只能调整90°探测器和其他探测器必须规范化使用后续步骤与另一个标准。峰展宽,inter-detector卷和尾矿计算应单独进行。gydF4y2Ba

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