学习用DLS/Raman谱学解析Lysozyme

工具拉曼光谱学和动态光散射(DLS)并用,可用于研究液态阵列演化过程和热应激条件回移过程通过这些辅助技术的组合,二级和三级蛋白结构标记(Raman光谱学)和尺寸变化(DLS)都可使用,以便更好地了解lyszyme和其他蛋白质的演化行为

实验研究关注骨骼930cm^-1950cm^{- 1}mideI(1600cm^-1-1700cm^-1和adid三类(1200cm^-1- 1300cm^-1标识区拉曼光谱这些地区的变异显示蛋白质二级结构变化高校结构变化通过分析暴理可见(850cm^-1和triptophan^-1拉曼光谱带.区域变化显示侧链局部疏水或流水环境变化,典型演化DLS测量法用于分析热压液化体积变化

蛋白质热量开始归并展开 变大体积增加 蛋白质结构标识变换拉曼数据 描述lyszyme行为

亚博网站下载方法与材料

带ZetasizerNanoZSP的纤维相联拉曼分光计集成马尔文剖析zetasizerHelix

ZetasizerNano系统结合非渗透反射检测技术与电阻技术、静态光和动态光散以量化0.3nm至10m蛋白体流动半径,富集度介于0.1mg/ml至100mg/mRaman光谱从150cm收集785nm感想^-1至1925cm^-14m^-1解决之道

suchyme鸡蛋白值3mg/ml和30mm/ml下一步采样aquots(~120ml)通过三毫米长的 quartzcvette引入采样区块采样区块温度可定从0°C到90°C++0.1°C

热跳试用拉曼频谱测量DLS低温测量,快速提高采样机箱温度高温,再进行拉曼和DLS测量,然后将区间温度恢复到初始低温Raman和DLS测量热斜坡研究收集DLS和Raman数据范围预定义0.1摄氏度至2摄氏度递增

结果与讨论

温度跳转研究

图1Raman光谱和DLS大小数据使用3 mg/ml(A)和30 mg/ml(B)lyzyme解析法研究温度跳转所有光谱数据都校正后台并归并到菲峰高度

温度跳转研究最初用于研究由热应激诱导出液态元件可逆性(图1)。Raman和DLS数据组合热跳实验显示Lyszyme发生

两组参数显示,当温度从20摄氏度(黑线表示)提高至80摄氏度(红线表示)时,3mg/mL(图1A左侧)和30mg/ml解析法(图1B左侧)的蛋白质结构变化可见

Raman光谱显示加热期间二级和三级结构标志的变化温度逆向20摄氏度(灰线表示)时,变化也倒置表示温度下降后结构变换可反转

类似地,用拉曼数据从lyszyme解析法获取DLS数据显示,当温度从20摄氏度升至80摄氏度时,3m/mzyme解析法的蛋白尺寸从~4Nm增至~5Nm(图1A右)和30m/ml解析法从~4Nm增至~7Nm(图1B右)。

按预测,高浓度液态溶液的大小变化较大大小变化显示蛋白质开始在高温展开完全减肥并不会发生,因为这可能导致聚积化

进行了温度斜坡研究,以进一步分析lyszyme在受热应激时经历的大小和结构变化。

温度潮流研究

温度斜坡研究通过采集Raman和DLS数据介于20摄氏度至80摄氏度间并重迭80摄氏度至20摄氏度间热斜坡研究DLS和Raman光谱数据显示,随着温度上升,Lyszyme解析中出现大小变化(图2B)以及二级和三级结构变化(图2A)。

图2Raman和DLS数据全温斜坡周期30 mg/mllysyme样本

温度下降到原温20摄氏度(红圈)后,大小还回溯到原温y4.5nm(图2B)。通过比较20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄氏度20摄2B内置80°C

Raman光谱数据连同热斜坡研究DLS数据再次显示,温度升高时会发生大小和结构变化,这些大小和结构变化是可以逆向变换的。

结论

组合dLS和raman分光镜成单件有效研究lyszyme演化过程可逆性,同时受pH4温度变化Raman和DLS结果显示,Lyszyme开始演化过程时温度提高,DLS数据显示蛋白尺寸提高,而Raman光谱数据显示二级和三级结构标志变换

温度减到20摄氏起温时,光谱和大小数据表明高温所观察的变异反转,表示发生的任何演化是可逆的。并发检测两种蛋白特征、结构与大小时热应激性为本研究期间蛋白行为提供了更全面的图片

亚博网站下载这些信息取自马尔文剖析公司提供的材料并经过审查修改

详情请访问马尔文剖析.