动态光散射和拉曼光谱估计BSA聚合动因

在蛋白质配方中,原生状态演化和聚合对病人和制造商都至关重要。产品质量安全关注需要理解聚合变化并仔细监测可能直接受配方稳定性影响的长期问题

动态光散射亚博网站下载已知技术用于描述悬浮纳米尺度材料流体半径Raman光谱学是另一种常用技术,提供全套蛋白质配方结构信息

将拉曼光谱学和DLS综合研究最理想地调查同时与蛋白流出并发现象,特别是当这些分析方法整合到单系统时提议数项机制描述蛋白质配方行为时间函数,通常高温孵化替代长期存储

文章描述对温度提高时孕育时间依赖分析 范围BSA配方DLS将用来监控聚合演化,而Raman光谱分析将用来跟踪蛋白质演化,全用单项实验

亚博网站下载方法与材料

纤维相联拉曼分光计集成马尔文剖析纳诺以获取拉曼分解稳定和DLS单样本序列数据Zetasizer纳米系统整合非渗透反射检测技术与电光分解,静态光分解和动态光分解,以确定0.15纳米至5微米蛋白流动半径,富集度介于0.1 mg/ml至>100mm

使用 785nmexcement (~350mW)^-1至1925cm^-14m^-1解析,raman光谱收集并用50 mg/ml浓度制作BSA样本pH 5.4、7.1和4.75

样本aliquts(~120ml)放入3毫米Quertzcuette并置入从0°C到90°C0.1oC提供温度控件的隔间

结果与讨论

DLS和raman谱数据

图125°C(蓝线)和85°C(红线)pH7配方

代表拉曼光谱图1显示25摄氏度和85摄氏度时pH7.1样本光谱从25摄氏度到85摄氏度发生重大变化,如AmideI^-1和Amide III (~12万5千米)^-1带子

特征指向BSA二级结构变换并证实温度提高后蛋白质展开相类似,大小数据显示温度函数从~7纳米(25摄氏度)向35纳米(85摄氏度)。结果表明55摄氏度时蛋白质聚集量相当大

判定过渡温度

浸入转换温度_t级)用于判定非均衡状态,即求聚合并实时跟踪过程进行数大温度斜坡实验以建立T_t级atpH利息后拉曼和DLS过渡曲线对每种配方都通融以确定相应的T_t级值.图2显示每种配方转换结果

图2蛋白转换曲线函数配方温度为pH7.1(蓝度)、pH5.4(红度)和pH4.7(绿度)。Al-Helix转换为e表显示为pH4.7结果集

图2显示T变化_t级PH的美德最重要的是不同样本间转换温度变化:pH4.7显示最小T_t级PH5.4样本显示最高PH4.7样本全光谱范围PLS预测通过嵌套图显示

绘制图还预测BSA中 Al-Helix和Di表结构量,视温度而定Al-Helix值似乎快速下降,BSA转换温度实现,表示BSA正在展开

大小衍生T结果_t级和T_t级表1显示从AmideI和AmideIII光谱区测定

表1过渡温度_t级DLS大小数据(Z平均值)和Raman光谱分析推导出各种BSA配方

BSA测试	大小(nm)	i(°C)	ide三类
PH7.1	64.5	64.8	64.6
PH5.4	64.4	66.1	66.6
PH4.7	56.5	59.6	59.6

视求解pHt_t级BSA从59摄氏度到65摄氏度不等

BSA聚合动因

依据表1显示的结果显示,60摄氏度表示为检验这些BSA配方聚合动能的起始点6摄氏60度对每种配方进行孵化,并相继每5分钟收集Raman和DLS数据60摄氏为bSA实验pH4.7显示快速降水白素条件下BSA聚合速度比可测量速度快图3汇总60摄氏度为pH5.4和7.1配方收集的DLS数据和Raman光谱数据

图3raman光谱数据(AmideI波段)和DLS结果bSA配方pH5.4和7.1时间零以蓝表示,编译完成红

图4imideI峰值和Z-Average尺寸相对变化

体积和演进动态密切跟踪pH7.1样本(图4),显示蛋白质流出和聚合同时距离pI

并观察二类样本的独特行为PH7.1离PI远,蛋白质开发由BSAZ平均尺寸跟踪表示蛋白质正向大体积发展,但没有大量归并PH5.4接近pI时,蛋白质聚集大但非展开

结论

合并拉曼光谱学DLS系统提供能力量化大小变化与分子结构变化并发组合方法描述蛋白运动行为和单项实验汇总行为,加深理解这两个进程之间的交互作用

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