使用组合技术描述蛋白质聚合

作为一个动态和静态光散射(DLS & SLS)系统,Zetasizer iV可以测量分子大小和分子量在一批电池,以及结合凝胶排阻色谱(SEC)系统配备一个OmniFACE连接盒(图1)。

优越的信噪比、90°检测角和可变功率激光衰减器,Zetasizer iV提供了宽动态范围与光散射计数率。

图1所示。的ZetasizerµV和OmniFACE A / D转换器的盒子。

此外,与一个非常小的光散射体积,Zetasizer iV可以测量非常小的样本。一批电池,该系统可以测量小2,而体积仅8 il流通池。也只需要几秒钟改变之间的批处理和色谱模式。

Zetasizer iV主要用于蛋白质的特性,和本文演示应用程序Zetasizer iV来衡量两种蛋白质的批处理和色谱模式。

实验结果

批DLS测量

起初,BSA蛋白测量及其批DLS测量如图2所示。峰的存在表明,蛋白质是一种非常干净的样品,不受任何聚合材料。

峰的Z-average半径是3.7海里,一个值略高于纯BSA单体。此外,多分散性指数(PDI)确定为0.16,显示人口有点多分散的。

然而,Cuvette-based批DLS测量不能解决个人的低聚物,从而提供一个峰值更高的多分散性。

BSA样品在色谱测量模式

相同的BSA测量样品在色谱模式使用第四Zetasizer配备第三方紫外线(紫外线;紫色)和折射率(国际扶轮;红色)探测器(图2)。

SEC的分子分离以这样一种方式进行最小的孩子最后洗脱。的分子量峰显示,主要的峰值是单体,二次峰值是二聚体和肩膀前缘二聚体的峰是微调(图2 b)。

图2 c描述了三个峰的测量半径3.5,分别为4.5和5.4海里。美国证券交易委员会的决议允许测量每个个体的数量。根据分子量的稳定性和大小在单体和二聚体的峰,每个峰代表一个单一形式的蛋白质(图2 b)。

高阶低聚物的co-elution少量由略向上的肩膀表示三聚物的尾巴。二聚体和三聚体蛋白样品的比例略低于10%。这两个群体的贡献值得认真研读略高Z-average价值获得批DLS测量相比,纯单体。

图2。答:批DLS BSA测量。b .派生色谱BSA的分子量覆盖。c .原始BSA的色谱图。

a-lactoglobulin是第二个蛋白质测量和批处理和色谱测量图3和图4所示。

图3显示了一批DLS测量之前通过一个0.02 im过滤器过滤。一致的人口为2.8 nm半径是观察在三个重复测量,清楚地揭示人口a-lactoglobulin。

额外的山峰从30 nm大小多达我观察到的测量表明聚合材料样本的存在。大约100海里和PDI的Z-average 0.08的样本代表的贡献聚合材料。过滤后的样品有Z-average 0.07 2.8 nm和PDI,揭示了通过样本过滤消除聚合材料。

图3。答:批处理过滤a-lactoglobulin测量。b .批过滤a-lactoglobulin测量。c .派生色谱与分子量覆盖。

过滤的交会测量样本呈现在图4中,清楚地显示两座山峰。的分子量峰洗脱后18毫升a-lactoglobulin决定这个峰值。

低分子量的多分散性和大小显示,这是蛋白质的稳定形式。偏差的大小(图3 c)和分子量峰内(图4)显示高的不稳定预期与蛋白质和寡聚物聚合相比。

图4。原始色谱与DLS覆盖半径。

结论

Zetasizer iV可以测量分子大小和重量在两个批处理和色谱模式。DLS是简单但非常快速,提供非侵入性的大小测量在小样本的蛋白质的量。其灵敏度较大的物种使它适合确定聚合材料在一个样本的存在。

内个体数量多分散的样本可以分开使用秒。SLS和DLS使测量的大小和分子量的人群,从而促进齐聚反应的状态的描述。

此外,可以量化的聚合材料确定批DLS测量。

这些信息已经采购,审核并改编自莫尔文Panalytical提供的材料。亚博网站下载

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