上下文生长因子三变异(EGFRVIII)是在几类癌症中发现的恒定和肿瘤特异变异这使EGFRVIII成为诱人抗菌素免疫法目标EGFRVIII目标pepti慢Fmoc去除率显示会影响EGFRVIIIpepti文章讨论微波技术对EGFRVIIIpeptide合成的影响,侧重于对合成的每一步应用微波辐照
试剂
Peptides国际公司提供所有Fmoc氨基酸和PCAS生物矩阵提供Rink Amide Chem-Matrix树脂EMD化工公司提供OxmaPure和N二甲基方程,Sigma Aldrich提供三异丙基硅酸(TIS)、三氟乙酸(TFA)、管状ine、WW、W-Diosoproclcardiimide(DIC)和326DioxaI-8-octedithiol(DDDTT)和VWR提供a
Peptide合成-LEEKKGNYVETHC-NH2
CEM自动微波浸泡合成器用于准备Rink Amide Chem-Matrix树脂(0.52mol/g)。微波去防护分两个阶段用20%管道条进行,初始去防护30s,后继去防护3min75oC传统去保护分两个阶段用同样的试剂进行,初始去保护5min
leu免保初始为30s除保并继以75摄氏度时二轮3min常规去保护Leu需要5分初始去保护热波联动反应五倍以上Fmoc-A-OH和1:1:1A/DIC/Oxyma传统联动使用相同的试剂lue联结需要75摄氏5美分和21摄氏30美分EGFRvIII四大综合使用表1汇总条件
表1.综合条件和结果准备EGFRVIII
| 项录 |
防守 |
并发 |
合成时间 |
粗洁纯度 |
| 一号 |
内存 |
内存 |
18h40分钟 |
18% |
| 2 |
内存 |
兆瓦 |
11h40分钟 |
25% |
| 3 |
兆瓦 |
内存 |
14h57分钟 |
39% |
| 4 |
兆瓦 |
兆瓦 |
8h44分钟 |
61% |
Conv=常规MW=微波
成品pitide为30min使用92.5:2.5:2.5TFA/H2O/TIS/DODT
Peptide分析和结果
粒化分析在214nm对称300C4列(5m,2.1x150m)中进行,梯度5-95%MCN加0.1%丙酸0-25m,列加热40C质量分析使用装有电喷离子化电机LCQ高级离合质谱仪
EGFRVIII首次合成使用传统条件在室温下全相联和去防护反应(表1,第1项)。约19小时完成反应 只产生18%粗洁去除N-Textinalleu和不完全去除Fmoc是合成关键产品(图1)。
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图1LC色谱合成EGFRVIIIRT=室温MW=微波
研究微波辐照对EGFRVIII合成的影响时,联动响应应用微波能进行,而去防护仍按常规条件进行合成时间缩短了35%以上,但浸泡粗纯度略微提高至25%,同时应用微波能组合响应合成显示合成时间略微下降,但粗纯度提高20%以上至39%
最后,合成工作通过应用微波能连接和反防护反应(Entry 4)粗纯度提高至61%,合成时间缩短到不到传统技术的一半
结论
EGFRVIII合成工作在微波和常规条件下进行,产生一系列粗洁度和合成时间,基于条件应用最优结果通过应用微波辐照实现联结和去防护反应微波技术既优于组合式反射法,也优于非组合式反射法,但分步优化法显示使用微波辐照比组合式反射对反射有更大影响
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