肽合成是一种涉及几种合成步骤的复杂过程。固相肽合成(SPP)是转化合成过程的初始步骤。通过微波合成通过缩短使用微波照射所需的时间来进一步加速该方法,这减少了偶联和脱保护步骤所需的时间。下一步是减少肽合成所需的时间和合成过程中产生的废物量。可以通过自由蓝色方便地完成这些步骤,而不会影响微波肽合成的高纯度。
图1。自由的蓝色
自由的蓝色
这自由蓝色(图1)使用肽化学改造的硬件和化学进步的前所未有的组合。没有限制点导致快速试剂添加。Liberty Blue进一步优化了微波步骤,以将最大可能量的微波能量施加到肽的情况下,而不会导致样品或不需要的副反应的过度加热。与传统(非微波)合成相比,这导致30倍的系统更快,比其他替代技术快五倍,比第一代微波系统快80%超过80%。
展示自由蓝色的生存能力
的能力自由蓝色这里通过用各种合成挑战合成三种不同的肽来证明。胸腺素(SdaavdtsseiTTKdlkekkevveea-NH2)特征β-分支侧链和ABC 20-MER(VYWTSPFMKLIHEQCNRADG-NH2)除了阿斯巴氨酰酰亚胺形成外,Cys及其残留物的差异存在困难。第三种肽是ABRF 1992(GVRGDKGNPGWPGapy)呈现δ-内酰胺形成的风险。
这些肽的合成是在常规(非微波)系统,第一代微波系统中进行的,以及新的快速微波方法的自由蓝色进行。在每种情况下,升高了合成速率,得到了肽,其肽更快地合成,可比或更好的粗纯度。
常规的合成和传统的微波合成产生了可比的废物,而在自由蓝色的合成过程中产生的废物量非常少(表1)。
表格1。肽合成结果与蓝色的自由
肽 |
自由蓝合成时间(比1速度快英石Gen Mw / Conv) |
自由蓝色溶剂/试剂废物(减少%) |
自由蓝色粗纯度(%) |
胸腺嘧啶 |
2:20(85/95) |
344毫升(85) |
60. |
ABC 20-MER |
2:15 (81/94) |
248毫升(85) |
70 |
Abrf 1992. |
1:47(81/93) |
188毫升(86) |
80 |
合成每种肽的时间花费小于2½小时,粗纯度≥60%。所有肽所测试的肽产生的废物量低于350ml。通过将循环时间降低到仅4分钟,所有情况下实现了较短的合成。缩短的4分钟循环包括在序列中偶联下一个氨基酸所需的所有步骤,包括微波脱保护和偶联,试剂加成和洗涤。
与常规合成相比,在大多数情况下,微波合成肽具有可比或更好的纯度。胸腺纯度纯度提高1.7倍,从35%到60%,而ABC保持相当的粗纯度(每项70%),ABRF 1992的粗纯度从56%增加到77%。图2显示了胸腺素的实施例色谱仪。
(一种)
(b)
图2。胸腺素色谱的例子。A.常规合成和B.微波合成。
结论
CEM进一步转化了肽合成与全新的发射自由蓝色系统。Liberty Blue是唯一能够在低于2小时内合成30-MEL肽的唯一肽合成蛋白,少量的废物产生。
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