免疫抑制剂药物影响免疫系统排斥外国组织和应用于器官移植患者。高度可变的药物动力学和狭窄的治疗指数,这些药物需要监控提高剂量的科学认识器官移植患者的要求。直到最近,分析这些药物用于治疗监测的主要方法。
液相色谱-光谱法(质/ MS)现在越来越多地用于免疫抑制剂药物的鉴定。质/ MS技术提供了独特的选择性、灵敏度和精度通过消除大免疫测定代谢物。它可以弥补初始高成本的质/ MS仪器和一个经验丰富的分析化学家如果用于高通量过程。
本文讨论了应用程序的EVOQ精英质/ MS系统从力量同时分析everolimus,西罗莫司,他克莫司和环孢霉素在人血浆。
EVOQ精英质/ MS系统
EVOQ三重四极的液相色谱(LC-TQ)(图1)是针对一个单一的目的——执行可靠的许多真实的样品最快的量化sample-to-report时间成为可能。
它提供了空前的灵敏度,线性、准确性、精度和广泛的动态范围多反应监测(MRM)化验。大气压电离(API)技术的发展和软件使其常规高灵敏度的革命性技术,定量分析。
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图1所示。EVOQ精英质/ MS系统。
系统delay-volume最低的可能,提前LC泵技术提供前所未有的弹道分析流速梯度再现性。这个design-for-purpose特性减少梯度延迟和确定高度精确的保留时间,从而导致较短的运行周期的再现性基本定量质/ MS分析。
OLE LC-TQ性能扩展的驱动模块通过促进步骤,在线清理或各种样品。将第三个泵在同一模块节省工作台空间和简化配置软件的全面控制之下,同时提供快速方法开发的灵活性。下面是关键的好处EVOQ精英质/ MS系统:
- 超高灵敏度的生物分子和小分子可以很容易地获得由于小说交错四极(智商)双离子漏斗。
- 可靠地运行matrix-rich样品基于强大的孔板API接口。
- 热不稳定分子可以有效地分析在高流速与创新的真空绝缘探针(VIP)加热喷雾调查。
- 节省时间的异常数据审查软件方便地强调色谱不满足预设的标准方法。
实验的程序
所涉及的样品制备稀释everolimus的标准解决方案,西罗莫司,他克莫司,在甲醇和环孢霉素主要股票的解决方案,其次是飙升在矩阵空白校准解决方案。等离子体的制备涉及混合矩阵空白9毫升冷乙腈为3毫升血浆(3:1 v / v)。
解决方案获得当时涡30年代和允许接受15分钟温度在15000转离心15分钟紧随其后。将上层清液分离为矩阵空白使矩阵飙升校准解决方案。
色谱法(推进UHPLC)
- 专栏:YMC Triart C18(50毫米x 2.1毫米x 1.9µm)
- 柱温:80°C
- 流量:0.5毫升/分钟
- 流动相:水有0.1%甲酸铵+ 10毫米的格式
- 流动相乙:乙腈0.1%甲酸
- 梯度条件:
| 0.00分钟 |
60%乙 |
| 1.25分钟 |
60%乙 |
| 1.40分钟 |
98%乙 |
| 3.00分钟 |
98%乙 |
| 3.01分钟 |
60%乙 |
| 4.00分钟 |
60%乙 |
- 注入量:5µl
质谱仪(EVOQ精英)
- HESI: + 4500 v
- 探头温度:450°C
- 探测气体:45单元
- 喷雾器气体:40单位
- 锥气体温度:350°C
- 锥气体:20单位
- 活动排:
- 碰撞气体:氩1.25毫托
结果
优化MRM转换为每个复合表1中列出。的选择性和灵敏度EVOQ精英质/ MS系统简化了样品制备只有蛋白质沉淀,从而使的直接喂养上层清液进行后续分析。质/ MS系统确定的浓度水平everolimus 0.5 ng / ml,西罗莫司和他克莫司和环孢霉素10 ng / ml在人血浆。
表1。优化MRM转换。
| 复合 |
父离子 |
产品离子 |
碰撞能量(V) |
| 他克莫司 |
821.5 |
768.3 |
16 |
| 西罗莫司 |
931.5 |
864.5 |
16 |
| Everolimus |
975.7 |
908.4 |
16 |
| Ascomycin(是) |
809.5 |
756.5 |
16 |
| 环孢霉素 |
1220.1 |
1203.2 |
22 |
| 环孢霉素D(是) |
1234.2 |
1217.3 |
21 |
等离子体的代表色谱在这些层面描述如图2所示。的力量”软件,控制EVOQ质/ MS系统配备可选PACER™软件,它允许基于异常的数据审查的大幅减少高峰一体化的出错率进行定量分析。
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图2。MRM色谱四Imminosuppressents等离子矩阵。
校准曲线的四个imminosuppressents等离子矩阵处理PACER™是如图3所示。所示的曲线是0.5 ng / mL为everolimus 50 ng / mL,西罗莫司和他克莫司的线性性R2> 0.997,从10 ng / mL 1000 ng / mL R的环孢霉素A和线性2> 0.995。
一系列7水平校准(每三个复制)和三个水平QC标准矩阵(每六个复制)反复进行5次以证实的健壮性EVOQ质/ MS系统。R2校准曲线的观察> 0.994,相对标准偏差为每个质量控制水平变化通常是3 - 8%超过200注射矩阵样本。
结论
在这个分析,EVOQ精英质/ MS系统是用于分析四人血浆样品接受免疫抑制剂药物后续的一个简单的蛋白质沉淀血浆样本。该方法被证明是快速、敏感和强大的改善定量的限制,容易满足要求量化这些药物在人血浆。
这些信息已经采购,审核并改编自力量——所提供的材料化学和应用市场。亚博网站下载
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